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妊娠期糖尿病患者和正常孕妇的内脏脂肪素 　　【摘要】 目的： 研究妊娠期糖尿病患者和正常孕妇的内脏脂肪素、脂联素在不同孕周的血清及新生儿脐血清中的表达。方法：2013年1月-7月在青岛市立医院产科产检的孕妇中，选取妊娠期糖尿病孕妇62例为试验组，正常孕妇68例为对照组。用ELISA方法检测31～33周孕妇血清，37～41周孕妇血清，足月新生儿脐血血清脂联素（adiponectin）、内脂素（visfatin）的含量。结果：随着妊娠的进展，血清脂联素水平呈逐渐下降，内脂素水平逐渐上升，三个采血时间段比较差异均有统计学意义（P0.001）。妊娠期糖尿病患者血清脂联素水平在中孕及晚孕均低于正常妊娠组，而血清内脂素水平在中孕及晚孕均高于正常妊娠组，两组比较差异均有统计学意义（P0.001）。新生儿脐血脂联素、内脂素水平显著高于母血，比较差异均有统计学意义（P0.001）。结论：可考虑应用血清脂联素水平与内脂素水平对妊娠期糖尿病进行预测及评估，并作为指导GDM的治疗的新的理论。 　　【关键词】 内脏脂肪素； 脂联素； GDM； 新生儿脐血 　　脂肪组织能供应能量、调节体温、填充固定、绝缘减震、贮存中性脂肪等，同时脂肪组织还是个内分泌器官，其代谢活跃、功能非常复杂，可分泌多种脂肪因子（adipocytokines），这些因子同样地影响和调节机体的能量代谢及各种功能[1]。已有研究证明脂联素（adiponectin）、内脂素（visfatin）在多种代谢综合征中发挥重要作用，GDM作为一种特殊的糖尿病类型应该同样存在脂肪细胞因子的表达紊乱，对此进行系统的研究有利于阐明脂肪组织功能紊乱与GDM发病的关系，为其预防与治疗提供理论依据。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 2013年1-7月在青岛市立医院产科产检的孕妇中，选取妊娠期糖尿病孕妇62例为试验组，正常孕妇68例为对照组。妊娠期糖尿病参照IADPSG2010诊断方法及标准，在妊娠24～28周首先检查FPG[2]。FPG≥5.1 mmol/L，可诊断。4.4 mmol/L≤FPG0.05），具有可比性。 　　1.2 标本采集 31～33周及分娩前采取空腹肘静脉血，孕妇采血前3 d正常饮食与作息，每日碳水化合物摄入量在150 g以上。采血前一晚要求禁食12 h，晨起8点抽取空腹静脉血，静置2 h使充分凝固，以1000 r/min离心10 min，取上清（血清）分装，-70 ℃冰箱保存备用。胎儿娩出断脐后立即采脐静脉血，静置2 h使充分凝固，以1000 r/min离心10 min，取上清（血清）分装，-80 ℃冰箱保存备用。但应避免反复冻融，-80 ℃不应超过1个月，标本溶血会影响结果，因此溶血标本不应进行此项检测。所有血样统一编号保存，各项指标均统一标准。 　　1.3 试验方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定母血和脐血血清内脂素水平，内脂素试剂盒购自美国RD公司，批内差异5%。试验开始前，各试剂均平衡至室温，严格按照说明书将标准品倍比稀释。分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔内加样品稀释液100 μL，其他孔分别加标准品或待测样品100 μL，注意将样品加于酶标板底部，不触及孔壁，轻摇动混匀，避免气泡，用酶标板覆膜，37 ℃温育2 h。弃去液体，甩干，每孔加临用前配制的检测溶液A工作液100 μL（生物素化抗体溶液），酶标板覆膜，37 ℃温育1 h。弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2 min，甩干。每孔加临用前配制的检测溶液B工作液100 μL（HRP酶结合物溶液），酶标板覆膜，37 ℃温育1 h。弃去孔内液体，甩干，洗板5次。每孔加底物溶液90 μL，酶标板覆膜，37 ℃避光显色，当标准孔的前3～4孔有明显的梯度蓝色，后3～4孔梯度不明显时终止。以与底物液的加入顺序相同的顺序加终止液50 μL终止反应，蓝色立转黄色。提前设定好酶标仪（美国BIO-RAD iMark型全自动酶标仪），在450 nm波长测量，直接读出检测样本的浓度值。 　　人脂联素酶联免疫吸附试验试剂盒试验原理：采用双抗体夹心ELISA法。用抗人脂联素抗体包被于酶标板上，试验时标本或标准品中的脂联素会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人脂联素抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人脂联素抗体与结合在包被抗体上的人脂联素结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物（TMB），TMB在辣根过氧化物酶的催化下显蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450 nm波长下测定OD值，脂联素浓度与OD450值之间成正比，通过绘制标准曲线求出标本中的脂联素浓度。试验室是用