妊娠期糖尿病母婴血清及胎盘内脂素变化及其与胎儿生长发育的相关性研究.docVIP

妊娠期糖尿病母婴血清及胎盘内脂素变化及其与胎儿生长发育的相关性研究 　　【摘要】 目的：探讨妊娠期糖尿病（GDM）母婴血清内脂素水平、胎盘及网膜脂肪组织内脂素基因表达及其与胎儿生长发育的关系。方法：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定40例妊娠期糖尿病及55例正常孕妇母血清及新生儿脐血血清中内脂素水平；采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测两组胎盘及网膜脂肪组织内脂素mRNA的表达。结果：（1）GDM组孕妇产前BMI、孕期体重增长、新生儿出生体重高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）。结论：GDM孕妇血清及脐血内脂素水平的升高可能参与了GDM的发生发展以及胎儿宫内发育的调节，循环中内脂素的变化主要来自于胎盘内脂素基因表达的变化。 　　【关键词】 内脂素； 妊娠期糖尿病； 胰岛素抵抗； 胎盘； 脐血 　　妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是威胁孕妇、新生儿健康的常见妊娠期并发症，可引起妊娠期高血压疾病、巨大儿、胎儿宫内窘迫和新生儿低血糖等，并可增加子代成年后罹患代谢综合征的风险。妊娠期糖尿病发病率有逐年上升的趋势，但其发病机制尚未完全明了。原有理论认为胎盘分泌的激素，如雌激素、孕激素、胎盘泌乳素（HPL）等对胰岛素的拮抗是导致GDM发生的原因之一。近年来研究表明，脂肪组织能分泌一类具有影响胰岛素敏感性和血糖稳态作用的因子，称为脂肪细胞因子（adipocytokines）。妊娠期胎盘同样能够分泌多种脂肪细胞因子，并参与GDM的发生。其中内脏脂肪素（visfatin）与胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）、妊娠期糖尿病的关系备受关注。本研究检测GDM患者母血和脐血血清内脂素水平，研究GDM患者胎盘组织及网膜脂肪组织中内脂素基因表达的变化，旨在探讨内脂素与GDM发病及其与新生儿生长发育的相关性。现将研究结果报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 选取2013年1-6月在本院产科定期产检并住院分娩的足月孕妇，参照2011年ADA诊断标准，将孕24～28周诊断为GDM的40例孕妇作为研究组（GDM组），随机选取同期正常孕妇55名作为对照组。所有研究对象均为单胎妊娠，于37～42周终止妊娠。两组受试者均无心血管病、无高血压疾病、无肝肾疾病、无感染、无孕前糖尿病以及甲状腺疾病，定期行常规产前检查直至分娩，且孕期唐氏筛查和三维超声提示低风险。告知患者本项研究相关内容、签署知情同意书，并取得本院医学伦理委员会许可。两组孕妇的年龄、孕次、产次、分娩孕周、孕前BMI比较差异无统计学意义（P0.05）；GDM组孕妇产前BMI、孕期体重增长、新生儿出生体重高于对照组，差异有统计学意义（P0.05），见表1。 　　1.2 研究方法 　　1.2.1 临床指标的测定 所有研究对象分娩前记录年龄、孕周、孕次、产次；测量身高、体重（脱鞋、免冠，仅穿内衣裤测量），计算体质量指数[BMI=体重（kg）/身高2（m2）]；询问孕前体重，计算孕前BMI及孕期体重增长。新生儿出生后，记录性别、出生体重、身长、头围、胸围，用于判断新生儿的营养状况。 　　1.2.2 血清及组织标本的收集 （1）于分娩前1～3 d清晨采集孕妇空腹静脉血5 mL，2000 r/min离心10 min，分离出血清；新生儿娩出后断脐前抽取脐静脉血5 mL，方法同上分离出血清，放置于-80 ℃冰箱保存，待统一检测血清内脂素水平。（2）胎盘娩出后立即在无菌条件下选取母体面中央并避开钙化灶，手术刀切取约1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm大小的胎盘组织2块，无菌生理盐水冲洗后立即投入液氮中速冻，然后转移到-80 ℃低温冰箱中保存用于总RNA提取。（3）所有研究对象如果行剖宫产术分娩，于术中取1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm大小的网膜脂肪组织2 块，去除肉眼可见的血管和血块，无菌生理盐水冲洗，同胎盘组织标本方法保存。 　　1.2.3 血清内脂素测定 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定母血和脐血血清内脂素水平，内脂素试剂盒购自美国RD公司，批内差异5%。实验开始前，各试剂均平衡至室温，严格按照说明书将标准品倍比稀释。分别设空白孔、标准孔、待测样品空。空白孔加样品稀释液100 μL，余孔分别加标准品或待测样品100 μL，加样时将样品加于酶标板底部，不触及孔壁，避免气泡，轻轻晃动混匀，酶标板覆膜，37 ℃温育2 h。弃去液体，甩干，每孔加临用前配制的检测溶液A工作液100 μL（生物素化抗体溶液），酶标板覆膜，37 ℃温育1 h。弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2 min，甩干。每孔