不同检验方法检验阴道念珠菌病的效果比较.docVIP

不同检验方法检验阴道念珠菌病的效果比较 　　【摘要】目的研究阴道念珠菌病运用三种不同检验方法的临床效果。方法我院选择2010年4月――2012年4月间到医院进行妇科检查的妇女，采集其阴道分泌物，分别应用凝集法、显色法以及PCR技术对检验结果进行鉴定。结果三种方法中运用PCR方法检出率最高，达到96.0%，其次为快速凝集法，最后为显色法，PCR方法的检出率显著高于其他两种方法，差异显著，有统计学意义（P0.05）。同时还要根据PCR电泳图谱来验证检验方法的准确性及检出率。结论PCR的操作简便，不需要运用很好的设备及实验材料，与过去的培养鉴定方法相比，前者更为迅速，具有更加广阔的发展前景。 　　【关键词】阴道念珠菌；不同检验方法；临床效果；对比分析 　　阴道念珠菌为一种条件性致病真菌，可以在阴道的任意部位粘附存活，感染念珠菌后多出现阴道相关疾病，例如阴道白斑、阴道念珠菌病等等。现今，主要运用培养、镜检以及形态来诊断阴道念珠菌感染所引起的疾病[1]。最近几年，由于分子生物学技术不断的应用于临床，并得到了大力的发展，在对真菌性疾病进行诊断时也逐渐开始应用一些分子生物学技术，例如：基因探针杂交技术及PCR技术等。本文对三种检验阴道念珠菌的方法进行研究，分别比较PCR、显色法、快速凝集法的检测结果。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料我院选择2010年4月――2012年4月间到医院就诊的300例阴道炎妇女，运用棉拭子采集其阴道分泌物。标准菌株为白念珠菌（ATCC 60193）、热带念珠菌（ATCC 201380）、克柔念珠菌（ATCC14243）。所有菌株均是由中国微生物菌种保藏管理委员会医学真菌中心提供的，应用时专用新鲜配制的沙堡固体培养基，恒温27℃进行孵育。患者临床主要表现为：白带增多，其内含有凝乳状及豆渣样粘稠物，也可表现为稀薄，但是含有一些白色的片状物，外阴及阴道会出现瘙痒症状，同时伴有烧灼感。 　　1.2检验方法 　　1.2.1凝集法根据念珠菌快速凝集测定试剂盒中的操作步骤进行操作，如标本中存在念珠菌，可通过肉眼观察到紫色的凝集颗粒，这时可以将其判断为阳性；如果标本中没有念珠菌，肉眼就看不到紫色的凝集颗粒，这时可将其判断为阴性。 　　1.2.2显色法将所取得的临床样本接种在科玛嘉念珠菌显色培养基上进行培养，出现阳性的样本挑取出来，将菌落移种在科玛嘉培养基上进行培养，通过在科玛嘉培养基上进行3次传代后，进行分离和纯化[2]。科玛嘉培养基对照结果显示绿色的为白色念珠菌，蓝灰色的为热带念珠菌，紫色的为光滑念珠菌，粉色的为克柔丝念珠菌。 　　1.2.3PCR法将科玛嘉显色培养平板纯培养的单菌落接种子挑选出来，放在3ml沙堡弱培养液中，在恒定37℃的情况下震荡培养48小时，之后运用核算提取试剂盒将DNA提取出来，以此作为PCR的模版，设计真菌保守区核糖体基因和ITS2基因区内引物，引物1及引物2的序列分别为：5-GCATCGATGAAGAACGCAGC-3；5-TCCTCCGCIAATTGATATCC-3[3]。50ulPCR反应体系中含有10PCR、5μl缓冲液，200μmol/L的dNTP，0.1μmol/L的引物，5μl的模板DNA及2uL Taq DNA聚合酶。循环条件：在恒温95℃情况下预变性5min，恒温94℃情况下预变性30s，恒温60℃情况下退火30s，72℃延伸60s，连续进行30个循环，最后一个循环在72℃时延伸7min。 　　1.3统计学方法进行统计学分析时采用SPSS18.0系统软件，运用X2表示三组检验阳性率，差异有统计学意义（P0.05）。 　　2结果 　　检验阳性率：在对阴道念珠菌进行检测时，三种不同检验方法中运用PCR方法检出率最高，达到96.0%，其次为快速凝集法，最后为显色法，PCR方法的检出率显著高于其他两种方法，差异显著，有统计学意义（P0.05）。同时还要根据PCR电泳图谱来验证检验方法的准确性及检出率。本文所采集的阴道分泌物进行真菌通同引物进行扩增。扩增片段的长度为：热带念球菌、白色念珠菌和克莱念珠苗均大约为500bp，光滑念珠菌大约为900bp，结果表明30个样本中有28例检测出有真菌存在。 　　3讨论 　　阴道念珠菌在妇科中较为常见，当女性机体的免疫功能下降时就会出现阴道酸碱失衡，引起阴道炎。这给女性的身心健康带来一定的影响，大部分患者是由于白色念珠菌感染。 　　最近几年，临床上越来越多的应用侵入性诊断治疗手段，例如化疗、手术干预、放疗以及联合治疗等等，同时大量的超广谱抗生素及各种免疫抑制剂等应用于临床，自身免疫力较低的患者临床上发生念珠菌感染的几率相对较高[4]。过去对病原菌的鉴定和培养需要较长的时间，特异性不强，很难满足现今临床上的需要，例如凝集