rolb、roc基因对转ri质粒三倍体毛白杨的转化.pdf

摘要 黜质粒上含有诱根基因即m，基因，将Ri质粒或单个或几个，DZ基因组合导入植 物体内均能提高植物的生根能力，但是某些植物在转入rol基因后往往会使植株表现 出一些不良的变异，如出现了植株矮化、叶面皱缩、节问缩短、分支能力增强等性状， 对植物的生长发育产生很大的影响。为减少rol基因对植物造成的不良变异，本文以 刘兴菊研究的转砌质粒30148菌株的三倍体毛白杨3个无性系为研究对象，通过对 叶片再生体系和遗传转化条件的优化，建立了高效离体再生系统和遗传转化体系，并 将ro／B、rolC诱根基因导入转m质粒的三倍体毛白杨，对部分转化再生植株进行了 形态鉴定、PCR检测和GUS组织化学染色检测，并对转化植株形态及生长变异和叶 片解剖结构进行了初步研究，主要研究内容及结果如下： 1．进行了叶片外殖体高效再生系统的研究，筛选出转m质粒的三倍体毛白杨叶 培养对诱导叶片不定芽的影响，结果表明，暗培养5d对不定芽诱导是有利的。 2．通过卡那霉素(}洫)敏感性试验，确定了诱导叶片外殖体不定芽的Km临界耐受 叶片不定芽的影响和对农杆菌的抑菌效果，结果表明，CTX适宜的抑菌浓度为400 nag．L．1。 3．对影响农杆菌转化效率的几个主要因素进行研究发现，转砌质粒的三倍体毛 白杨叶片外殖体适宜的侵菌时间是8min，侵染后共培养2d可获得较好的转化效果。 体毛白杨叶片共培养，通过在50mg．L-1Km的培养基上筛选后，获得了Km抗性植株， 对部分抗性植株进行了PCR检测，证明ro／B、rolC基因已整合到转鼬质粒三倍体毛 学染色分析表明，GUS基因主要在根尖、茎及叶脉维管束组织中特异表达。 5．进行了转基因植株形态及生长变异的研究，发现与转砌质粒三倍体毛白杨相 比，大部分转rolB基因无性系植株矮化，叶面积增加，茎分支能力增强，节间距缩 短，生根率及根数量降低，高生长量减少；大部分转role基因无性系叶面由原来的 皱缩变为平展，茎分支能力增强，节间距缩短明显，生根率、根数量及高生长量增加。 6．对转基因植株叶片解剖结构及组织厚度进行了观察，结果表明，转基因无性系 叶片解剖结构变化不明显。大部分转rolB基因无性系叶片厚度、叶肉厚度与其转鼬 质粒无性系对照相比差异显著，栅栏组织和海绵组织厚度差异不显著，50％的转ro／B 基因无性系的表皮厚度与其转硒质粒无性系对照相比差异显著。大部份转rolC基因 无性系叶片厚度、叶肉厚度与其转砌质粒无性系对照相比差异不显著。转鼬质粒不 同无性系在转rolC基因后，栅栏组织厚度变异程度不同，75％的转rolC基因无性系 海绵组织厚度与其转m质粒无性系对照有显著差异。转坩fC基因无性系的表皮厚度 与其转砌质粒无性系对照无显著差异。 关键词：转m质粒三倍体毛白杨；，D毋基因；加圮基因；遗传转化；生长变异 TransformationofRi TransformationPlants plasmid role tomentosarolBand Gene ofTriploidPopulus by Author．SU Yan-ping GeneticsandTree Major．Forestry Breeding andPro．YANG Supervisor．Pro．ZHOUHuai-jun Min-sheng Abstract Ri containrol thatcaninduceformationofadventitious plasmid genes roots， transformationofRi oreachOrseveralrol to