o型口蹄疫病毒p1蛋白的原核表达及反应原性检测.pdf

齐岛，北人。訾颂卜学竹论文 摘要 。型口蹄疫病毒YPl蛋白的原核表达及反应原 性检测 摘要 1酶切位点。用PCR的方法扩增得 639bp基因片段引物，引物两端分别加勘脯，和Not 到VPl基因，将其克隆到pMDl8-TVectol进行饽列测定．用分子生物学软件对本试验 测定的FMDVVPl基因序列与GenBank已公布的O型FMDVVPl基因序列进行同源性比较， 结果显示扩增到的VPl基因序列与GenBank已公布的0型FMDVVPI的基因序列的同源 组克f药齐『7而进行双酶切得到639bp的目的片段，将其以正确阅读框架定向插入 l pET一32a(+)中，然后转化至昱col，BL21 发j见VPI基因得到了高效表达，且表达产物分子量约为48KD。 2、将高效表达的目的蛋白经超声波裂解，取沉淀和上清分别进行可溶性分析，发 现表达蛋白以包涵体的形式存在。表达的重组蛋白变性，纯化，复性后，经蛋白免疫印 迹(Weste 有较好的反应原性，为进一步研制口j寺疫基因工程疫苗和诊断试剂盒奠定基础。 ‘_—’’——’——‘u 关键词：口蹄疫病毒；VPl基因；基因克if；原核表达；反应原性 青岛《、业人学硕十学亿论文 ABSTRACT ofFool-and-mouthdiseasevirus Prokaryoticexpression OVPl and of type proteindetecting ABS一1RA(：T totheVPI FMDV of of inGenBank，a I．According gene published pairprimers，whichrespectively containsrestrictionBamH／andtvotl．ncrc and was enzyme designedsynthesized．639bpfragmentamplified PCRandclonedinto vectorfor was withthoseofother by pMDl8·T sequening．’fhesequencecompared FMDVOstrainsin theresultshowedthattheVPI wasover type GenBank．and gene 93％identicaltonlose virusstrainsof wasevenover Io andRUSisloate．Atierthe GenBank，and 98％identicalCHA．LAO，MOG was withrestriction wasclonedinto cloningplasmiddigested enzyme，pmilied 639bpfragment plasmid thenthe wm