移植物抗宿主病小鼠肝脏及异体CD8^＋T细胞趋化因子和趋化因子受体表达分析.pdfVIP

维普资讯 《现代免疫学~2007年第 27卷第 5期 ·397 · 移植物抗宿主病小鼠肝脏及异体 OD8+T细胞趋化因子和趋 化 因子受体表达分析 曹琦 ，何珊 ，邱玉华。，马泓冰。，周同 ，沈天伟 ，陈罗刚 ，张雁云 · (1、上海交通大学医学院 上海市免疫学研究所 ，上海 200025；2、中国科学院上海生命科学研 究院 ／上海交通大学医学 院 健康科学研 究所 ，上海 200025；3．苏州大学医学 院，苏州 215007；4．上海交通大学医学 院附属瑞金 医院，上海 200025) 摘要 ：为探讨趋化 因子及其受体介导的效应性细胞迁移在移植物抗宿主病(graft—versus—hostdisease，GVHD)发生发展 中的 重要作用 ，采用次要组织相容性抗原异配的GVHD小 鼠模型，应用流式细胞分选术 (FACS)、实时荧光定量聚合酶链反应 等方法 ，分析GVHD靶器官和异体 CD8 T细胞趋化因子及受体 的表达 。肝脏高表达干扰素诱 导蛋 白一10(IP一10)、f扰素 诱导的T细胞趋化 因子(ITAC)、 干扰素诱生单核因子 (MIG)、巨噬细胞炎症蛋 白(MIP)一1a／0等趋化 因子 。异体 CD8 T 细胞上则高表达 CXC趋化因子受体(CXCR)3和 CC趋化 因子受体 (CCR)5。随着肝脏趋化 因子 的表达增加 ，异体 CD8 T 细胞迁移浸润的数量也增高。因而趋化因子及异体 CD8 T细胞 卜趋化 因子受体 的特异对应关系，促使大量异体 CD8 T 细胞迁移浸润并造成肝脏损伤 。 关键词 ：趋化因子及其趋化因子受体 ；移植物抗宿主病 ；异体 CD8 T细胞 中图分类号 ：R392．4 文献标识码 ：A 文章编号 ：100l一2478(2007)05—0397—06 目前认为，移植物内的T细胞 的活化及持续 织 ，因而趋化闪子及其受体介导的效应性细胞的迁 存在 ，是移植物抗宿主疾病 (graftversus—hostdis— 移是GVHD发生发展过程中的重要环节。 GVHD)发生发展 的关键因素…。利用模拟 1 材料与方法 临床骨髓移植的小 鼠同种异体骨髓移植 GVHD模 型发现 ，骨髓移植后受者体 内的异体效应 型记忆 1．1 材料 CD8T细胞是直接造成 GVHD持续损伤 的病理 1．1．1 主要试 剂 TRIzol总 RNA提 取 剂 (In— 性细胞 。GVHD在 临床上可导致多个靶组织如 vitrogen，美 国)，ReverseTranscriptionSystem 肝脏、皮肤 、消化道等损伤 ，这种病灶部位的差异 (Promega，美 国)，SYBRGreenMasterPCR mix 性与病灶组织分泌的趋化因子及不同时相 T细胞 (AppliedBiosystems，美 国)，淋 巴细胞分离液 表达相应受体问的相互作用密切相关。经过分析表 (AX1S—SH1EID，挪 威 )，磷 酸 盐缓 冲 液 (phos— 明移植后的最初几天里 ，供者 T细胞进入淋 巴组 phatebufferedsaline，PBS)(GIBCO，德 国)，胎 织 ，在淋 巴组织 中被活化，然后迁移进入靶组 牛血清 (fetalcalfserum，FCS)(杭州 四季青公司)。 织 j。除此以外 ，若在移植 的起始时就给予能够 抗小 鼠 CD8免疫磁珠 (Meltenyi，德 国)。藻胆蛋 阻断淋巴细胞从淋 巴组织 中迁 出的 卜磷酸神经鞘 白 (PE)标记 的抗 小 鼠 CXCR3抗体 (R D sys— 氨醇的阻断剂 FTY720 j，可减少靶组织中淋 巴细 terns，美国)。 胞的浸润 ，降低 GVHD 的致死率。这些结果表 1．1．2 主要器材 IS免