小鼠Dnd1酵母双杂交系统诱饵载体的构建及自身激活检测.pdfVIP

( ) 湖南师范大学学报 医学版 　2008, 5 ( 1) ( ) J Hu nan N orma l U niv M ed S i 1 3 小 鼠 Dnd1酵 母 双 杂 交 系 统 诱 饵 载 体 的 构 建 及 自 身 激 活 检 测 1 2 2 2 3 1 3 张 　菁 ,罗 　畅 ,丁小凤 ,张 　健 ,彭小宁 ( ) 1. 湖南师范大学医学院 ,湖南 长沙 　410006; 2.湖南师范大学生命科学学院基因敲除与转基因动物实验室 ,湖南 长沙 　410081 　　 [摘要 ] 　目的 :构建用于酵母双杂交系统 的诱饵 载体 pDBL eu 2Dn d1,并检测其 是否有 自身激活作用 。方法 :设计引物 引 入 Sal Ⅰ、N ot Ⅰ酶切位点 ,使用 PCR 方法 从质粒 p DNA 3. 12Dnd1 中扩 增小鼠 Dn d1基因 的编码区序列 , 连至 pMD 182T 载体 。 酶切验证及测序正确后 ,用 Sa l Ⅰ,N ot Ⅰ内切 酶分别 消化 pMD 2T2Dnd1及 pDBL eu载体而后 构建诱饵载体 pDBL eu 2Dnd1,并检 测其在 GIBCO /BRL 公司的酵母双杂交系统中的自身激活作用 。结果 :成功构建诱饵载体 pDBL eu2Dnd 1,并证明其在该系统中 无 自身激活作用 。结论 : pDBL eu 2Dn d1可应用该酵母双杂交系统筛选与之相互作用的蛋白。 [关键词 ] 　Dnd1基因 ;酵母双 杂交系统; 自身激活作用 [中图分类号 ]Q 789　　　 [文献标识码 ]A 　　　 [文章编号 ] 1673 - 016x (2 008) 0 1 - 0001 - 04 C on str u t ion an d A t iva t ion of “Ba it P la sm id ”C on ta in in g M ou se D n d 1 G en e in Y ea st Two2hybr id Sy stem 1 2 2 2 3 1 3 ZHAN G J ing , LUO Ch ang , D NI G X iao 2feng , ZHAN G J ian , PEN G X iao2n ing ( 1. M ed i in e S hoo l, Hun an N orm a lU n iversity, Chan gsha 4 10006, Ch ina; 2. Gene Kn o k2ou t and T ran sgen i Anim a ls L ab, Co l