细菌分离培养接种技术及生化.pptVIP

2.吲哚试验(IndoleTest)原理：色氨酸吲哚+丙酮酸吲哚+吲哚试剂(对二甲氨基苯甲醛)→玫瑰吲哚培养基：蛋白胨水方法：将待测菌接种于上述培养基中，35℃24~48h，加入吲哚试剂，观察结果结果：于两者液面交界处出现红色为阳性，不变色为阴性。应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴别，如大肠埃希菌为(+)，产气肠杆菌(-)。色氨酸酶某些细菌第29页，共42页，星期日，2025年，2月5日3.硫化氢试验原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸产生H2S，当它与培养基中的Fe2+或铅离子相遇时，则形成黑褐色的FeS或PbS沉淀。此试验可间接用于检测是否产生H2S。培养基：醋酸铁(铅)培养基。方法：将待测菌接种于醋酸铁(铅)培养基中，35℃培养1~2天，观察结果。结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性。应用：主要用于肠杆菌科中细菌属和种的鉴别。沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属，绝大多数为阳性，其他菌属为阴性。第30页，共42页，星期日，2025年，2月5日第1页，共42页，星期日，2025年，2月5日一、培养基的种类和选择

(一)基本条件1.合格的细菌实验室2.合格的无菌实验室3.基本设备和器具第2页，共42页，星期日，2025年，2月5日(二)培养基培养基(culturemedium)是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。用途：①可用于细菌的分离纯化、传代和菌种保存②可用于研究细菌的生理生化特性③是对病原菌分离鉴定的主要环节和必不可少的手段第3页，共42页，星期日，2025年，2月5日1.培养基的组成成分：⑴营养物质：水、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、无机盐、鸡蛋和动物血清、生长因子（Vit、aa、嘌呤、嘧啶等）。第4页，共42页，星期日，2025年，2月5日⑵凝固物质：最常用的为琼脂(agar)，它是从石花菜中提出来的一种半乳糖胶，100℃溶解，40℃凝固，可利用琼脂来改变培养基的物理性状(固体或半固体)，它是理想的固体培养基的赋形剂，其本身不被细菌分解利用，也无营养作用。第5页，共42页，星期日，2025年，2月5日⑶抑菌剂和指示剂：不是细菌生长繁殖的必需物质，是制备细菌的选择、鉴别培养基和判断结果的需要。常用的抑菌剂有：胆盐、煌绿、亚硫酸钠、亚硒酸钠及一些染料和某些抗生素等。常用的指示剂有：酚红、中性红、甲基红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中国兰等酸碱指示剂，美兰为常用的氧化还原指示剂。第6页，共42页，星期日，2025年，2月5日2.培养基的分类液体培养基：牛肉汤(牛肉浸液+1%蛋白胨+0.5%NaClpH7.4)半固体培养基：加0.2~0.5%agar固体培养基：营养物+2%agar按物理性状第7页，共42页，星期日，2025年，2月5日基础培养基：是其他培养基的基础，如普通肉汤、普通琼脂平板、斜面、高层营养培养基：BAP、罗-琴培养基、吕氏血清斜面选择培养基：SS平板、BS平板、Mac平板等鉴别培养基：糖发酵管、MIU、KIA、TSI等特殊培养基：厌氧培养基、高渗培养基等按用途第8页，共42页，星期日，2025年，2月5日3.常用培养基的制备⑴肉膏汤的制备：0.3%牛肉浸膏+1%蛋白胨+0.5%NaCl加热溶解，调pH7.4~7.6，分装，121℃，20分钟高压灭菌冷后待用。可用于标本和细菌的增菌。⑵普通琼脂平板、斜面、高层：肉膏汤+2%agar，加热溶解，121℃，20分钟高压灭菌冷至50℃平皿→普通琼脂平板：分离纯培养和药敏倾倒试管(斜放)→普通琼脂斜面：增菌、保存细菌试管(直立)→普通琼脂高层：备用第9页，共42页，星期日，2025年，2月5日⑶血琼脂平板：普通琼脂平板营养物质灭菌冷至50℃+5%~10%脱纤维SRbc或RR