耐有机溶剂菌的筛选及芒果苷衍生物的初步探索公开课一等奖优质课大赛微课获奖课件.pptxVIP

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研究背景:

芒果苷含有广泛药理活性,如抗氧化,抗炎等,芒果苷对治疗糖尿病,降血脂,免疫调整以及抗肿瘤治疗有较好应用前景。但由于其溶解性和跨膜通透性均很弱,生物利用度低,制约了芒果苷药理作用发挥,为了改进其不足,提升生物利用度,通常在其结构基础上添加基团或者是制备成其单钠盐形式,即芒果苷衍生物。

芒果苷化学结构式

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芒果苷生物转化

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芒果苷衍生物合成办法

微生物转化法

环节多,副产物多,污染严重,条件苛刻。

条件温和、反应类型多样、无污染、成本低、副产物少,能定位反应。

化学合成法

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有机溶剂耐受菌:一类新能与有害影响原因竞争并能在有机溶剂中茁壮生长微生物

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试验研究环节

采集土样

耐有机溶剂菌筛选

建立耐有机溶剂菌库

底物复筛

分析

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采集土样

初筛

以15%叔丁醇为筛选压力。

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转接,稀释涂布,划线单离:

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富集与冻存:

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筛得耐有机溶剂菌落以及菌株形态(部分):

编号

菌落形态

菌体形态

NJ-2-1

菌落小,乳白色,圆形。

长杆,革兰氏阳性。

NJ-3-2

菌落小,淡黄色,圆形。

长杆,革兰氏阴性。

NJ-4-2

菌落大,白色,假根状。

长杆,革兰氏阴性。

NJ-5-2

菌落中档,白色,不规则。

粗短杆,革兰氏阴性。

NJ-6-1

菌落极小,红色,圆形。

细短杆,革兰氏阳性。

NJ-7-1

菌落大,白色圆形,有褶皱。

短杆,革兰氏阴性。

NJ-8-2

菌落小,乳白色,圆形。

短杆,革兰氏阳性。

共筛得59株耐有机溶剂菌,分别有20株G+,39株G-。菌株以杆状为主,有6株球状。

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底物复筛:

菌种活化

发酵产酶

TLC及HPLC分析

转化

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薄层检测:

展层剂:

正丁醇:水:乙酸

5:4:1

对照NJ-8-2NJ-3-2

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高效液相色谱分析:

对照

菌株NJ-8-2

芒果苷衍生物10%

芒果苷

芒果苷

对照:

条件:30%甲醇、流速1.0ml/min、波长316nm。

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试验小结:

成功筛选出59株耐叔丁醇菌株。

对这些菌株进行了转化试验,筛选出2株有也许催化芒果苷生物合成芒果苷衍生物菌株。

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展望

在本试验基础上还能够展开下列研究:

进一步验证所得菌株能够催化芒果苷合成芒果苷衍生物;

确认该芒果苷衍生物结构及生理活性;

(3)通过发酵条件优化提升芒果苷衍生物产率。

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