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研究背景:
芒果苷含有广泛药理活性,如抗氧化,抗炎等,芒果苷对治疗糖尿病,降血脂,免疫调整以及抗肿瘤治疗有较好应用前景。但由于其溶解性和跨膜通透性均很弱,生物利用度低,制约了芒果苷药理作用发挥,为了改进其不足,提升生物利用度,通常在其结构基础上添加基团或者是制备成其单钠盐形式,即芒果苷衍生物。
芒果苷化学结构式
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芒果苷生物转化
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芒果苷衍生物合成办法
微生物转化法
环节多,副产物多,污染严重,条件苛刻。
条件温和、反应类型多样、无污染、成本低、副产物少,能定位反应。
化学合成法
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有机溶剂耐受菌:一类新能与有害影响原因竞争并能在有机溶剂中茁壮生长微生物
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试验研究环节
采集土样
耐有机溶剂菌筛选
建立耐有机溶剂菌库
底物复筛
分析
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采集土样
初筛
以15%叔丁醇为筛选压力。
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转接,稀释涂布,划线单离:
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富集与冻存:
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筛得耐有机溶剂菌落以及菌株形态(部分):
编号
菌落形态
菌体形态
NJ-2-1
菌落小,乳白色,圆形。
长杆,革兰氏阳性。
NJ-3-2
菌落小,淡黄色,圆形。
长杆,革兰氏阴性。
NJ-4-2
菌落大,白色,假根状。
长杆,革兰氏阴性。
NJ-5-2
菌落中档,白色,不规则。
粗短杆,革兰氏阴性。
NJ-6-1
菌落极小,红色,圆形。
细短杆,革兰氏阳性。
NJ-7-1
菌落大,白色圆形,有褶皱。
短杆,革兰氏阴性。
NJ-8-2
菌落小,乳白色,圆形。
短杆,革兰氏阳性。
共筛得59株耐有机溶剂菌,分别有20株G+,39株G-。菌株以杆状为主,有6株球状。
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底物复筛:
菌种活化
发酵产酶
TLC及HPLC分析
转化
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薄层检测:
展层剂:
正丁醇:水:乙酸
5:4:1
对照NJ-8-2NJ-3-2
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高效液相色谱分析:
对照
菌株NJ-8-2
芒果苷衍生物10%
芒果苷
芒果苷
对照:
条件:30%甲醇、流速1.0ml/min、波长316nm。
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试验小结:
成功筛选出59株耐叔丁醇菌株。
对这些菌株进行了转化试验,筛选出2株有也许催化芒果苷生物合成芒果苷衍生物菌株。
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展望
在本试验基础上还能够展开下列研究:
进一步验证所得菌株能够催化芒果苷合成芒果苷衍生物;
确认该芒果苷衍生物结构及生理活性;
(3)通过发酵条件优化提升芒果苷衍生物产率。
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