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2018-05-18 发布于上海
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ape1基因沉默对人肝癌mhcc97h体内成瘤能力及ap1信号通路的影响word格式论文

APE1 基因沉默对人肝癌MHCC97-H体内成瘤能力及AP-1 信号通路的影响摘要目的观察APE1基因表达沉默后对人高侵袭肝癌细胞株MHCC97-H在裸鼠体内成瘤能力的影响，及其在AP-1信号通路的作用，为进一步阐明肝细胞癌增殖及侵袭转移的分子机制提供实验依据。方法培养人高侵袭肝癌细胞株MHCC97-H，使用慢病毒载体介导的siRNA技术，用构建的LV-APE1-shRNA（实验组）表达载体感染MHCC97-H细胞，并设LV-APE1-NC（空载体）组和control（空白对照）组，随后将3组细胞分别接种于裸鼠皮下，第21d 处死裸鼠，剥瘤称重，计算抑瘤率，绘制肿瘤生长曲线。制作移植瘤组织HE切片，观察肿瘤细胞形态。采用RT-PCR及Westernblot方法分别检测各组裸鼠移植瘤组织中APE1及其下游AP-1信号通路相关基因c-Fos、c-Jun、caspase-3和MMP-2的mRNA及蛋白表达水平。采用TUNEL法检测各组肝癌细胞的凋亡情况，计算凋亡指数。结果1．LV-APE1-shRNA组裸鼠移植瘤生长缓慢，肿瘤体积（0.467±0.052）cm3及质量（0.267±0.082）g均小于LV-APE1-NC组（1.700±0.063）cm3、（1.018±0.160）g和control组（1.780±0.095）cm3、（1.107±0.178）g，差异有统计学意义(P0.01)；LV-APE1-shRNA组肿瘤抑制率为73.772%。2.HE染色镜下形态显示，LV-APE1-shRNA 组肿瘤组织坏死少见，较多肿瘤细胞凋亡小体，病理性核分裂5个/HPF。LV-APE1-NC组和control组肿瘤组织坏死明显，可见散在肿瘤细胞凋亡小体，病理性核分裂5个/HPF。3．RT-PCR结果显示，LV-APE1-shRNA组APE1、c-Fos、c-Jun、caspase-3及MMP-2的mRNA表达水平明显低于LV-APE1-NC组和control组，差异有统计学意义(P0.01)。APE1 基因沉默后可下调90.622%APE1、47.580%c-Fos、47.402%c-Jun、65.355%caspase-3、64.369%MMP-2的mRNA表达，APE1与c-Fos、c-Jun、caspase-3、MMP-2mRNA的表达呈正相关性。4.Westernblot结果显示，LV-APE1-shRNA组APE1、c-Fos、c-Jun、caspase-3及MMP-2的蛋白表达水平明显低于LV-APE1-NC组和control组，差异有统计学意义(P0.01)。APE1 基因沉默后可下调72.439%APE1、71.872%c-Fos、80.399%c-Jun、75.616%caspase-3、88.393%MMP-2的蛋白表达，APE1与c-Fos、c-Jun、caspase-3、MMP-2蛋白的表达呈正相关性。5．TUNEL法凋亡检测实验发现，LV-APE1-shRNA组肿瘤组织凋亡细胞数明显高于LV-APE1-NC组和control组，差异有统计学意义（P0.01）。LV-APE1-shRNA 组肿瘤细胞凋亡指数为5.503％，LV-APE1-NC组为2.911％，control组为2.569％。结论1.成功构建人高侵袭肝癌细胞株MHCC97-H裸鼠移植瘤动物模型，慢病毒载体介导的APE1基因沉默可显著抑制MHCC97-H细胞株在裸鼠体内的生长。2.RT-PCR及Westernblot实验表明，APE1、c-Fos、c-Jun、caspase-3和MMP-2 基因在移植瘤组织中的mRNA及蛋白表达明显受到抑制，APE1 对c-Fos、c-Jun、caspase-3、MMP-2 的表达具有正向调控作用。APE1可通过调控AP-1 信号通路参与肝癌的增殖及侵袭转移。3.肿瘤细胞形态学观察结果和TUNEL法凋亡检测实验分析显示，APE1基因沉默可抑制肝癌细胞增殖，促进肝癌细胞凋亡。关键词：APE1；MHCC97-H；裸鼠；肝癌；移植瘤；侵袭转移；AP-1 信号通路；凋亡Influences ofAPE1 gene silence onforming tumorin vitro andAP-1 signal transduction pathwayof human hepatocellularcarcinoma cell line MHCC97-HAbstractObjectivetoinvestigatetheinfluencesofAPE1genesilenceonformingtumorinvitroandAP-1signaltransductionpathwayofHumanHepatocellularCarci