alc1与ezh2在肝癌中的表达及其相关 性研究word格式论文.docxVIP

中文摘要ALC1 与 EZH2 在肝癌中的表达及其相关性研究研究生： 董文伟导师： 马宁芳 教授中文摘要背景与目的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上发病率第五位的肿瘤， 死亡率位居各类肿瘤第三，其发病隐匿、术后复发率高、放化疗不敏感。统计 资料显示，全球范围内每年约有 100-150 万例 HCC 新发病例，其中 45%病患发 生在中国。HCC 的发生是一个多基因参与、多步骤、多阶段的过程，其中起关 键作用的是癌基因激活和抑癌基因的失活。各种因素导致的癌基因和抑癌基因 表达异常，引起肝细胞增殖、分化异常，机体对异常细胞监控和杀灭作用减弱， 最终导致了 HCC 的发生。因此，探讨 HCC 发病机制、寻找特异性分子靶点以 有效阻止 HCC 的发生发展是本研究领域的重点内容。ALC1(amplified in liver cancer 1) ， 又 名 CHD1L(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene)，最早在肝癌组织内发现，定位 于染色体 1q21 区，基因 mRNA 全长 2.98Kb，编码 897 个氨基酸的蛋白。ALC1 在肝癌组织中高度扩增，其 mRNA 与蛋白高表达于肝癌组织内，在肝癌的恶性 进展中起重要的作用。必威体育精装版的研究发现 ALC1 在胚胎干细胞中有表达，与干细 胞的增殖及分化有关，因此，进一步深入探讨 ALC1 的调控机制对于筛选安全 有效的肝癌治疗靶点有重要意义。EZH2 (enhancer of zeste homolog 2)基因是果蝇 zeste 基因增强子的人类同 源物，属于 PcG (polycomb group genes)家族。EZH2 定位于人染色体 7q35-q36 位置上，可对染色体进行修饰，从而调控基因转录，在胚胎发育、干细胞的维1广州医科大学硕士学位论文持以及肿瘤发生和转移等过程中发挥着重要作用。EZH2 可催化核小体组蛋白H3 亚基第 27 位赖氨酸的三甲基化（H3K27me3）并引起下游基因（如:p53,p21） 的沉默，从而在细胞周期调控、细胞分化、衰老以及肿瘤发生等一系列生命活 动的过程中发挥关键性的作用。在多种肿瘤中如胃癌、肝癌、淋巴瘤、乳腺癌、 膀胱癌、前列腺癌等均可检测到高表达的 EZH2。ALC1 与 EZH2 同为染色质结 构相关基因，文献资料显示两者在肝癌组织中表达趋势相似，但其是否存在联 系目前尚不明确，本研究拟从细胞及组织水平对其进行深入探讨。方法1. 临床收集原发性肝细胞性肝癌及其匹配的癌旁组织58例（我校附属医院2008 年1月-2010年12月手术切除并经临床病理学证实为HCC），常规制作蜡块，用 组织芯片仪制备肝癌组织微阵列；免疫组织化学方法检测ALC1与EZH2在肝癌 及癌旁组织中的表达，结合临床资料进行统计学分析。2.应用 RT-PCR 和细胞免疫荧光双标记方法，从 mRNA 水平及蛋白质水平研 究 ALC1 与 EZH2 在肝癌细胞中的表达情况。3. 应用 q-PCR 和 Western Bloting 方法检测 siRNA 干扰肝癌 HepG2、Huh7 细 胞 ALC1 表达对 EZH2 表达的影响，探讨其临床病理学意义。结果1. 成功制备肝癌及其癌旁组织微阵列。2. 肝癌组织芯片免疫组织化学检测结果显示肝癌组织中 ALC1 与 EZH2 均表达 于肝癌组织的胞核，癌旁组织内为阴性表达，其共表达率为 48.1%，统计学分 析结果显示 ALC1 与 EZH2 的表达呈正相关（P＜0.05）。ALC1 阳性表达与患 者肿瘤大小、肿瘤数量、肝硬化以及肿瘤的临床分期正相关（P＜0.05），与 患者的年龄、性别、血清 AFP 水平、肿瘤血管侵袭、乙肝病毒感染等临床病理 参数之间未见统计学相关性(P＞0.05)。EZH2 阳性表达与肿瘤的临床分期呈正 相关（P＜0.05），与患者的年龄、性别、血清 AFP 水平、肿瘤血管侵袭、乙 肝病毒感染、肝硬化等临床病理参数之间未见统计学相关性(P＞0.05)。2中文摘要3. 肝癌细胞内有 ALC1 及 EZH2 的 mRNA 表达；免疫荧光双标记显示阳性表达产物均定位于肝癌细胞胞核，HepG2 细胞中 ALC1 与 EZH2 阳性表达率分别为 78.0%和 89.2%，Huh7 细胞中 ALC1 与 EZH2 阳性表达率分别为 53.6%和 74.6%， 两者在 HepG2 细胞中的共表达率为 71.2%，Huh7 细胞中两者共表达率为 47.3%。 4. siRNA 干扰 ALC1 表达可明显降低 EZH2 mRNA 和蛋白表达水平。结论1.ALC1 与 EZH2 在肝癌细胞中有共表达