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ALDH1在子宫肌瘤细胞中的表达及ATRA对COLⅠ和FN表达的影响摘要目的:维甲酸最先应用于对恶性肿瘤的影响，近年来发现，有抗纤维化作用，减少细胞外基质的沉积。已有研究表明维甲酸通路与子宫肌瘤的发生有关，本课题研究与维甲酸合成有关的重要酶ALDH1在子宫肌瘤中的表达，探讨全反式维甲酸对体外培养子宫肌瘤细胞中COLⅠ、FN表达的影响以及对细胞增殖和凋亡的作用，为子宫肌瘤药物治疗提供新的实验依据。方法:应用胶原酶消化法分离、获得子宫肌层细胞和子宫肌瘤细胞，免疫细胞化学SABC法进行细胞学鉴定。应用RT-PCR检测子宫肌层细胞和子宫肌瘤细胞中ALDH1、COLⅠ、FNmRNA的表达。应用不同浓度（10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L）全反式维甲酸干预后，分别于24、48、72、96h应用MTT法检测细胞增殖活性，同时为后续研究筛选出有效作用时间点；应用RT-PCR检测各组COLⅠ和FN mRNA表达；应用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:1.成功培养了人子宫肌层细胞和子宫肌瘤细胞，且经免疫细胞化学鉴定证实。2.半定量RT-PCR结果显示子宫肌瘤细胞组中ALDH1 mRNA低表达而正常的子宫肌层细胞组中高表达；COLⅠ、FNmRNA在子宫肌瘤细胞组中高表达而在正常子宫肌层细胞组中低表达，差异均具有显著性(P0.05)。 3.空白组子宫肌瘤细胞体外生长曲线形态良好，全反式维甲酸以剂量-时间依赖性方式抑制肌瘤细胞的增殖。同一时间点，当药物浓度为10-8mol/L时,可抑制肌瘤细胞的生长,和对照组相比差异有显著性（P0.05）,且随着全反式维甲酸浓度的增加, 其抑制增殖作用逐渐增强,差异具有统计学意义（P0.05）。同一浓度，各个组随着时间的延长，其抑制作用逐渐增强，差异具有统计学意义（P0.05），加药后72 小时抑制作用最显著，96h抑制率趋于平稳,药效趋于饱和。因此，在后续的实验中选取72h为研究的有效作用时间点。4.半定量RT-PCR结果显示低浓度（10-8 mol/L）全反式维甲酸可降调肌瘤细胞中COLⅠ、FNmRNA的表达(P0.05)，随着药物浓度的增加，其COLⅠ、FNmRNA表达逐渐降低，且高浓度（10-6mol/L)药物组与中浓度（10-7mol/L)药物组比较，差异具有统计学意义(P0.05)。5.不同浓度（10-8、10-7、10-6mol/L）全反式维甲酸作用于肌瘤细胞72h 后，可见不同程度的细胞凋亡，且随着药物浓度的增加，凋亡率逐渐上升，差异具有显著性（P0.05）。结论:1.ALDH1在子宫肌瘤中低表达，肌层中高表达；COLⅠ和FN在肌瘤中高表达，肌层中低表达,提示子宫肌瘤的发生与ALDH1减少有关，而导致维甲酸生成减少，推测子宫肌瘤的发生与维甲酸通路关系密切。 2.全反式维甲酸能够抑制肌瘤细胞体外增殖活性，且存在着剂量-时间依赖性。3.全反式维甲酸可降调肌瘤细胞中COLⅠ、FN的表达，且存在浓度依赖性。4.全反式维甲酸能够促进肌瘤细胞的凋亡，且随着浓度的增加，作用逐渐增强。关键词：子宫肌瘤；全反式维甲酸；乙醛脱氢酶1；胶原蛋白Ⅰ；纤连蛋白；增殖；凋亡ExpressionofALDH1inthehumanuterineleiomyomacellsandtheeffectofATRAonexpressionofCOLⅠandFNAbstractObjective:Retinoicacidwasfirstappliedtotheimpactofcancer,Inrecentyears,foundthatit hadanti-fibrosis,reducingextracellularmatrixdeposition.Ithasbeenfoundthatthe incidenceofuterinefibroidshaveconnectionwithretinoicacidpathway.Thistopicis studywiththeretinoicacidsynthesishaverelatedofimportantenzymeALDH1 expressioninuterineleiomyoma.Toinvestigatetheeffectsofall-transretinoicacidonexpressionofcollagenⅠ,fibronectinandontheproliferationandapoptosisofuterineleiomyomacells in vitro.Methods:Isolatedbycollagenasedigestionmethodappliedtoobtainmyometrialcellsand uterineleiomyomacells.RT-P