apa微囊化hbmp2在强力霉素调控下表达word格式论文.docxVIP

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2018-05-18 发布于上海
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apa微囊化hbmp2在强力霉素调控下表达word格式论文

TheExpressionofhBMP-2GeneInducedbyDOXinAPAMicrocapsulesAbstractObjective:Tostudytheeffectsofsodiumalginate-poly-L-lysine-sodiumalginate(APA)microencapsulatedimmunoisolationtechnologyonthegrowthcharacteristicsanddifferentiationsofbonemarrow-derivedmesenchymalstemcells(BMSCs).TouseAPAmicroencapsulationtechnologytobindupthebonemarrow-derivedmesenchymalstemcellsco-infectedbythevirusofAdeno-X-TRE-hBMP-2andtheAdeno-XTet-On.HighexpressionofhBMP-2genecouldbedetectedwithDOXinduction.BiologicalactivityofhBMP-2wastestedbyosteogenesisofBMSCs.Thisstudycouldprovidsufficientboneformationfactortorepairbonedefection,andshowthefeasibilitythatimmunologicrejectionwastackledbyAPAmicrocapsule,whentheBMSCsco-infectedbythevirusweretransplanted.Metheod:1．Adeno-X-TRE-hBMP-2PlasmidwasreproducedinTG1,andthenwascellectedandidentified.TouserestrictionenzymePacItomakeAdeno-X-TRE-hBMP-2linearity.2．ThelinearDNAsegmentofrecombinantAdeno-X-TRE-hBMP-2wasimplantedintoHEK293cellsbyLipofectamine2000,andthentheinfectiousrecombinantadenovirusparticleswasgained.3．BDAdeno-XTRE-βgalControlVirusStockandBDAdeno-XTet-OnvirusStockwasamplifiedinHEK293cells.4．ThebestMOIwasidentfiedbythevirusofAdeno-XTRE-βgalandAdeno-XTet-Onco-infectingBMSCs.5．BMSCswereco-infectedbythevirusofAdeno-X-TRE-hBMP-2andtheAdeno-XTet-OnwiththeoptimalMOI.TheBMSCsco-infectedwaswrapedinAPAmicrocapsulebytheuseofthepulsedhigh-voltageelectrostaticmicrocapsuleinstrument.ThecomplexwasnamedBMSCs-APAmicrocapsuleComplex.6．ThesurvivalrateofBMSCsinAPAmicrocapsulewascheckedbythestainsofFDAandEB.7．TheexpressionofhBMP-2geneinAPAmicrocapsulewasinducedbyDOXatdifferentconcentration（1.0ug/ml,10ug/ml,100ug/ml,200ug/ml,300ug/ml）anddetectedbyWESTERNBLOTING.Toanalysizethequality-effectrelationshipbetweenDOXandhBMP2,ELISAwasemployedtodectecttheexpressionofhBMP-2.8．TheosteogenesisofhBMP-2wastested,whetherBMSCschangedtoosteoblastundertheinfluenceofthehBMP-2.Result:1．TheAdeno-X-TRE-hBMP-2plasmidwasconfirmed.2．ThelinearrecombinantDNAfragmentswereconstitutedsuccessfully