微生物学 NO2 纯培养和显微技术.pptVIP

目的微生物分离纯化的基本流程 1.采样 sampling 2.预处理 preetreatment 3.富集 enrichment 4.分离 separation 5.纯化 purification 6.鉴定 identification 7.保藏 preservation 六、二元培养物 培养物中只含有二种微生物，而且是有意识的 保持二者之间的特定关系,如寄生、伴生和捕食。 病毒和宿主细胞----二者具有严格的寄生关系，二元 培养物是保藏病毒的有效途径，在实验室条件下可 以认为接近于纯培养物。 纤毛虫、变形虫和粘细菌----与其它微生物属于捕食 关系，二元培养方法是分离纯化此类微生物的有效技 术之一。 第二节 显微镜和显微技术 几个基本概念： 放大 分辨率 反差 被观察物越小，放大倍数应越大，否则难以看清！ 能辨别两点之间最小距离的能力 被观察物区别于背景的程度 与显微镜的自身特点有关，但也取决于进行显微观察时对显微 镜的正确使用及良好的标本制作和观察技术，这就是显微技术。 一、显微镜的种类及原理 1. 普通光学显微镜 复 式 显 微 镜 光学显微镜一般配置的最大放大倍数是多少？为什么？ 如何实现光学显微镜一般配置的最大放大倍数？其原理？ 目镜：10 ~ 15 ×；物镜： 100 × ；总放大倍数1000~1500 × ； 使用油镜，即在100 ×物镜和载玻片之间滴加香柏油； 1. 普通光学显微镜 0.5 l 分辨率（最小可分辨距离）= ———— n sin θ θ为物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和工作距离 1. 普通光学显微镜 0.5 λ 分辨率（最小可分辨距离）= ———— n sin q N：玻片与物镜间介质的折射率 显微观察时可根据物镜的特性而选用不同的介质 空气 (n=1.0)、水 (n=1.33)、香柏油 (n=1.52)、玻璃 ( n=1.54) 很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。 介质折射率提高 数值孔径值和分辨率均得到提高 浸没油与玻璃的折射率相近 光学显微镜物镜的特性 人眼的分辨能力在0.2 mm左右，因此光学显微镜的最大 有效放大倍数（使用油镜）是1,000×到1,500×。 普通光学显微镜又称明视野显微镜 其照明光线直接进入视野，属透射照明。 2. 暗视野显微镜 暗视野显微镜由于样品与背景之间的反差增大,可以清晰地看清楚明视野不易看到的活菌体等微小颗粒。 3.相差显微镜 形成亮背景暗物象的结果 4.荧光显微镜 5.透射电子显微镜；6.扫描电子显微镜 5. 透射电子显微镜；6. 扫描电子显微镜 5. 透射电子显微镜；6. 扫描电子显微镜 冰冻蚀刻技术 7. 扫描隧道显微镜 7. 扫描隧道显微镜 第2章纯培养和显微技术 微生物的基本特点： 小！ 在绝大多数情况下都是利用微生物的群体来研究其属性 微生物的物种（菌株）一般也是以群体的形式进行繁衍、保存 培养技术在微生物学中具有重要意义！ 纯培养技术是进行微生物学研究的基础 无菌技术是保证微生物学研究正常进行的关键 决定了显微技术是进行微生物研究的另一项重要 技术，因为绝大多数微生物的个体形态及其内部 结构只能通过显微镜才能进行观察和研究。 小！ 微生物的基本特点： 小 Outline 研究微生物 “看到”微生物 在个体水平上 在群体水平上 2.1纯培养技术 一、无菌技术 二、用固体培养基分离纯培养 三、用液体培养基分离纯培养 四、单细胞（孢子）分离 五、选择培养分离 六、二元培养物 七、菌种保藏 2.2 显微技术 一、显微镜的种类及其原理 二、显微观察样品制备 第一节 微生物的分离和纯培养 从自然状态下混杂的群体中分离特定的某一种 微生物----即获得纯培养，是研究和利用微生物的 第一步。 一、无菌技术（aseptic technique) 在分离、转接和培养纯培养时，防止其被其它微生物污染的技术称为无菌技术。 灭菌（sterilization)：使用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物。 无菌操作:在转接、培养微生物时防止其它微