【教案】【人教版】选修一生物：5.1《DNA的粗提取与鉴定》导学案.docVIP

专题5课题1 DNA的粗提取与鉴定 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 提取生物大分子的基本思路是选用一定的 或 方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在 和 性质方面的差异，提取 ，去除其他成分。 （1）DNA的溶解性： （1）DNA的溶解性： DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的 中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使 充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 此外，DNA不溶于 溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。 （2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性： 蛋白酶能水解 ，但是对DNA 影响。大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温，而DNA在 ℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解 ，但对DNA 影响。 （二）DNA的鉴定 在 条件下，DNA遇 会被染成 色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 二、实验设计 （一）实验材料的选取 凡是含有 的生物材料都可以考虑，但是使用 的生物组织，成功的可能性更大。 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的 ，同时用玻璃棒 ，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用 溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的 和 ，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。 （三）去除滤液中的杂质 方案一 利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中 的不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质。 方案二 直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10～15min，嫩肉粉中的 能够分解蛋白质。 方案三 将滤液放在 ℃的恒温水浴箱保温10～15min，注意 范围。 （四）DNA的析出与鉴定 1、将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积 、 的酒精溶液（体积分数为 ），静置 min，溶液中会出现 ，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒 搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。 2、取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为 的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的 试剂。混合均匀后，将试管置于 中加热5min，待试管 后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变 。 实例：用鸡血细胞液粗提取DNA并鉴定（苏教版必修2） 步骤 操作 图示 1、提取鸡血细胞的细胞核物质 将制备好的鸡血细胞液（已在课前配好）5~10mL，注入到50ml烧杯中。向烧杯中加入 20mL，同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌5min，然后，用放有纱布的漏斗将血细胞过滤至1000mL的烧杯中，取其滤液。 2、溶解DNA 将物质的量浓度为 40 mL加入到滤液中，并作玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。 3、析出含DNA的粘稠物 沿烧杯内壁缓缓加入 ，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现。继续加入蒸馏水，溶液中出现的黏稠物会越来越多。当黏稠物不再增加时停止加入蒸馏水。 4、滤取含DNA的粘稠物 用放多层纱布的漏斗，过滤溶液至1000 mL的烧杯中。取纱布上的 。 5、将DNA的粘稠物再溶解 取一个50 mL烧杯，向烧杯内注入物质的量浓度为 20 mL。用钝头镊子将纱布上的黏稠物夹至NaCl溶液3min，使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中。 6、过滤含DNA的氯化钠溶液 取一个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤以上溶液。取其滤液（DNA溶于 中）。 7、提取含杂质较少的DNA 在上述滤过的溶液中，加入 的、体积分数为 mL（加入时动作要慢当玻璃棒上出现丝状物缠绕时，继续慢慢搅拌，至不再增加时， 8、DNA的鉴定 取两支20 mL的试管，各加入物质的量浓度为 5mL， mL的二苯胺试剂5min，等试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。 三、操作提示