猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定.pdfVIP

·34· 第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会论文集 猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定 杨德康1，王桂军h，李郁1，朱良强2， 王 非2，孙 裴1，秦爱建3，魏建忠h (1．安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥230036； 2．安徽省动物疫病预防与控制中心，安徽合肥230031； 3．扬州大学兽医学院，江苏扬州225009) 摘要：采集临床疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病料，经处理后进行细胞培养、电镜观察、半数细胞感染量测定、间接免疫荧光试验、动物 nnl的病毒粒 回归试验以及RT．PCR检测，分离到1株病毒。分离株在Marc．145细胞上连续4代后出现特异性细胞病变；电镜观察到直径50一80 子，有囊膜；TCID，0为lO-4·7／0．1 SC}107。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；分离；鉴定 2006年夏季，我国南方数省暴发的猪“高热1．3主要试剂及试剂盒 PRRS 病”，给养猪业带来巨大损失，安徽省也未能幸免。 RT—PCR检测试剂盒购自北京世纪元亨动 现有的研究结果表明猪“高热病”为多病原混合感 物防疫技术有限公司；琼脂糖为Sigma公司产品； 染及继发感染引起的HJ，其中猪繁殖与呼吸综合征 and vi— 培养基购自GIBCO公司；犊牛血清购自杭州四季青 病毒(porcinereproductiverespiratorysyndrome Ills，PRRSV)是主要病原心J。安徽农业大学动物传生物材料有限公司；其他常规试剂均为分析纯。 染病实验室进行的流行病学调查结果也证实了 1．4细胞培养 PRRSV为安徽猪“高热病”的主要病原之一。在此 生长液为含有8％胎牛血清(NCS)、青霉素100 基础上，本试验对临床疑似PRRS的病例进行病毒分U／mL、链霉素100 离鉴定，旨在为了解安徽地区流行的PRRS毒株的生为含2％NCS，青、链霉素各100U／mL的DMEM培 物学特性，并进一步研制相应疫苗奠定基础。 至单层后传代培养。 1材料与方法 1．5病料的处理 1．1病料 无菌采集发病仔猪的淋巴结、肺脏、脾脏等组织 采自安徽省部分疑似发生PRRS猪场发病仔猪的并剪碎，用不含血清的DMEM液研磨制成5一10倍 000 肺脏、脾、。肾、淋巴结等组织。 的乳悬液，反复冻融3次后，经10 r／min离心20 1．2毒株、细胞及血清 min，上清悬液用0．22岬微孔滤膜过滤除菌， -20 PRRSV oC保存备用。 VR-2332参考毒株、Marc一145细胞由浙 江农科院惠赠；抗PRRSV猪阳性血清、阴性血清由1．6病毒的分离 江苏农科院惠赠；FITC．羊抗猪IgG，购自北京博奥生 取1mL上述处理的病料上清液接种长成单层的 生物技术有限公司。 Marc一145细胞，37℃吸附1h后倒弃接种液，补加 PRRS症状的弱仔猪的发病死亡，可能与这些猪已隐看，疫苗接种似乎能在一定程度上控制特种野猪群 性感染PRRSV而抵抗力较弱有关；此外，接种时已PRRS发病疫情，但这一举措是否符合养猪生产的长 发病的猪只也在接种疫苗后死亡。死亡现象平息后， 远利益，免疫后猪群是否带毒和排毒