猪细小病毒PPVSD1株NS1基因的克隆与原核表达.pdfVIP

第十三次学术研讨会会议论文集 表位首先应容易位于或移动于蛋白质抗原表面，这有利于与抗体结合。此外，B细胞抗原表位通常 位于抗原分子的柔性区，具有可动性。这一特点有利于表位和抗体结合部位呈现最佳的结构互补状 态。互补性一旦提高，结合的亲和力就增强。从上世纪80年代Hopp和Wbods提出亲水性参数对抗 原表位预测的方法以来【18】，已有许多参数、算法发表，对B细胞蛋白抗原表位研究起到巨大的推 活动性的方法【ll】。指出蛋白抗原构象不是刚性不变的，其多肽链骨架有一定程度的活动性，活动性 强的氨基酸残基即可塑性大的位点，易形成抗原表位。1988年，J锄es伽和Wbrf提出一种综合预测 方案，各因素的权重分配为：蛋白质二级结构占40％，亲水性占30％，表面可及性占15％、柔韧性 大。当然，其它抗原指数较高的区域也有可能是其抗原表位。 3．4 蛋白结构和抗原性仍知之甚少。虽然本研究得到的只是PPv．N株结构蛋白VPl的二级结构和B细 胞抗原表位的预测结果，该蛋白最终的二级结构和B细胞抗原表位尚待进行生物学实验验证，但预 测结果对于PPV-N株的进一步分子免疫学研究和反向疫苗学设计提供一定的理论依据。 ◆考文t(略) 猪细小病毒(PPV)SDl株NSl基因的克隆与原核表达：l： 谢金文1’2沈志强“112王金良1’2任艳玲1’2管宇1’2苗立中1．2 (1，山东省畜禽用蜂胶疫苗工程技术研究中心；2、山东省滨州畜牧兽医研究院，滨州山东256600) 30a／Nsl转化E∞“曰￡2l(DE3)， 表明Nsl基因具有高度保守性。进一步插入到原核表达载体中，并将构建的pET 毒Nsl基因在原核细胞中得到表达，主要存在于包涵体中． 关奠词猪细小病毒；Nsl基因；克隆；原核表达 猪细小病毒(Porcine 流产和死胎的病原学研究中，分离出猪细小病毒，首次证明了该病毒的致病作用。猪细小病毒感染 的主要特征是怀孕母猪在怀孕前易于感染，引起胚胎或者胎儿的感染和死亡，最终导致母猪发生流 产、死胎、木乃伊胎及新生仔猪的死亡【l2J。成熟的PPV病毒粒子基因组是一条长约5000bp左右的 frame，oRF)，编码区内基因相互重叠。5’ 单股负链DNA，主要有2个开放的阅读框架(openreading 5’端的ORF编码的NSl基因是细小病毒属的保守序列，核苷酸同源性可达70％，氨基酸同源性更 高。PPV非结构蛋白Nsl中有1个长约150个氨基酸组成的GⅪ矾区，开始于第389位的氨基酸， 所有的细小病毒中都有此保守序列，可以作为细小病毒诊断的探针。NSl具有解旋酶活性，改变DNA 末端的空间结构，是病毒复制所必需的，同时具有调节P40转录的作用。NSl蛋白是PPV基因组本 身编码的反 式激活蛋白，对PPV早期和晚期的转录都起重要作用【2硎。NSl蛋白不仅参与和促进病毒DNA ·基金项目：山东省自然科学基金项目(Y2005D10) 1作者简介：谢金文(1981．)，男，安徽利辛人，研究实习员，硕士，主要从事分子生物学与兽医免疫学方面的研究． Tel：05433403061，Bmajl：98x吲inwen@163．com 宰·通讯作者：沈志强，E·111ail：bzshenzq@si越．c锄 73l 猪的传染病一猪细小病毒病 复制及病毒衣壳蛋白的合成，还具有抑制多种异源启动子的作用，并在NS2蛋白的协同作用下对转 化细胞有直接毒性作用，其在抑制肿瘤方面起重要作用，表现出抗肿瘤活性p卅J。目前，猪细小病毒 感染在全世界许多国家和地区均有流行，中国也不例外。中国于20世纪80年代初在不同地区分离 到猪细小病毒，此后全国各地陆续都有猪细小病毒感染的报道：据报道，我国猪群中PPv血清阳性 率高达80％左右【2】。特别是近年来，猪细小病毒感染呈扩大上升的趋势，给养猪业带来了巨大的经 济损失。为进一步研究猪细小病毒NSl基因，建立快速、准确诊断猪细小病毒的方法，减少猪细小 病毒造成的损失，笔者克隆了含有Nsl基因的片段，并与已登录猪细小病毒的相应序列进行了比较； 成功构建了原核表达重组质粒PET30a／NSl，并在E∞打中进行了诱