脐带血造血干细胞扩增技术研究进展.docVIP

精品论文 参考文献 脐带血造血干细胞扩增技术研究进展 深圳华毓造血干细胞研究有限公司 广东深圳 518000 　　摘要：自从1988年运用脐带血移植治愈了Fanconi患者以来，便开始了脐血的研究，脐带血已经广泛应用于临床，体外进行脐带血造血干细胞(CB HSCs)的扩增可以产生数量较多的细胞，解决了单份脐带血移植的缺陷。本文介绍了脐带血造血干细胞扩增技术的研究进展。 　　关键词：脐带血；造血干细胞；扩增技术 　　1脐带血造血干细胞(CB HSCs)可移植性 　　研究表明CB中有丰富的HSCs，其含量与骨髓（BM）是一致的，但是HSCs亚群的比例不同。CB的单个细胞中CD34+的细胞含量低于BM，CD34+/CD38-的细胞含量与BM相似，CD34+/CD38-/HLA-DR-的细胞含量高于BM，CB HSCs的扩增和增殖能力要高于BM HSCs，可以对体外扩增的HSCs造血能力进行重建。如果将CB以及BM CD34+细胞输入体内，可以产生同样的造血能力，如果将它们移植入SCID-hu bone 小鼠体内，CB的植入效果要优于BM。CB HSCs会分泌一些满足自身成长的因子，受到细胞因子的作用，CB HSCs会迅速的进行细胞增殖，且其细胞粒端长于BM细胞，表明CB HSCs具有可移植性。 　　2影响体外扩增的因素 　　CB HSCs的体外扩期特性受到许多因素的影响，如培养条件、细胞因子等。下面分别进行介绍。 　　2.1起始培养细胞 　　进行造血干细胞扩增研究时，用分选CD34+做为起始培养细胞，进行体外扩增，CD34+细胞的纯度对其定向分化能力具有决定性的作用，因为这些非纯化细胞会消耗大量的营养物质，改变培养体系的PH值，通过细胞纯化可以减少脐带血标本中的非目标细胞的含量。通过对CD34+的纯化效果与HSCs的扩增效果进行对比，可以看到CD34+细胞和总HSCs扩增比例要高于HSCs。CD34+的纯度对细胞扩增程度也会产生影响，如果纯度为62%，则可以收到最好的细胞扩增效果，实验表明并非纯度越高扩增效果就越好，具体原因可能是CD34+纯化技术会丢失部分细胞。有研究表明在CD34+细胞之前会存在CD34-的HSCs，其具有更加强大的造血重建能力，比CD34+细胞具有更高的造血细胞谱系，在分选CD34+细胞时会丢失一些表述为CD34-的造血重建细胞。有时也会用HSCs做为起始培养细胞，但是脐带血HSCs的体外扩增能力不如CD34+细胞，CB中的辅助细胞对CD34+细胞的扩增不会造成影响，与CFU-GM一起的CD34+细胞扩增能力会增加3倍。CB CD34+细胞纯化是必须的，但并不是纯度越高越好，纯化如果适度会减少标本的体积，保留了一部分淋巴细胞和单核细胞，会增加CD34+细胞的扩增能力。 　　2.2培养体系 　　2.2.1基质细胞层 　　很多基质细胞系会用来进行早期造血调控机制的研究，具有体外扩增的能力。如果在临床上应用体外扩增细胞，这些基质细胞可能会受到微生物的感染，会引发传染性疾病，所以寻找新的基质细胞是非常重要的。Kohler T等研究了脐静脉内皮细胞和骨髓基质细胞对CB HSCs扩增的作用，分析了扩增后CD34+细胞、CD34+/CD38-细胞亚群的比例。 BMSC的的添加会促进CD34+细胞的增殖，说明体外CD34+细胞的扩增受到BMSC的协助。产生这种差异的原因是骨髓基质结构支持HSCs的生长。基质细胞会产生一些细胞因子和基质支持HSCs体外扩增。 　　骨髓间充质干细胞会提供一个适合细胞因子、胞外基质和粘附分子附着的造血微环境，在此微环境下，更有利于干细胞的增殖，同时其可以分泌白细胞介素，巨噬细胞集落刺激因子和干细胞因子支持骨髓LTC-Ics的生长。脐血MSCs进行体外扩增，MSCs会对CD34+细胞产生影响，使得CD34+表面形成的CD34+/CD38-/HLA-DR-高于单细胞因子，且MSCs存在条件下，扩增后的CD34+细胞会保持自身原有的状态。 　　如果一个培养体系有助于人造血细胞体外生长，那么该培养体系中一般含有基质细胞，但有关实验也证明无基质细胞的培养体系也对CB MSCs体外扩增有促进作用。如果将其应用于临床，无基质培养体系会简化培养过程，减少细菌污染的机率，减轻患者病经济负担。 　　2.2.2血清 　　血清是天然培养基，营养丰富，可以促进细胞的生长与繁殖，目前最常用的是小牛血清。如果在临床上使用含有异源血清的培养体系扩增的细胞，则容易会引起污染。于是人们开始尝试用人体血浆来替代异源血清和无血清培养体系。CB血浆与人体血浆相比，CD34+细胞的扩增能力更强，CB血浆中含有较高水平的细胞因子，会激活休眠细胞。有研究表明，若培养体系中含有CB血浆，细胞的扩增效率会增加，而其中CD34+细胞与CD34+/