人骨肉瘤组织中miR-93的表达变化.docVIP

精品论文 参考文献 人骨肉瘤组织中miR-93的表达变化 长沙市第八医院 长沙市中医医院 410100 摘要：目的：研究骨肉瘤组织中mir-93的表达变化及化疗对其表达的影响。方法：收集10例正常骨组织及13例人骨肉瘤组织标本，用原位杂交和Real-time PCR方法检测标本中miR-93的表达情况。结果：原位杂交结果显示：A组（新辅助化疗前骨肉瘤活检组织）mir-93的表达高于B组（新辅助化疗后骨肉瘤手术切除组织），P＜0.05；A组mir-93的表达高于C组（正常骨组织），P＜0.05。Real-time PCR显示：A组mir-93表达高于B组，Plt;0.01；A组mir-93表达高于C组，Plt;0.01；B组mir-93表达高于C组，Plt;0.01。结论：发现骨肉瘤组织中mir-93呈高表达，化疗后其表达降低，初步说明mir-93可以作为一个辅助诊断骨肉瘤和监测骨肉瘤化疗效果的新指标。 关键词：miRNA；miR-93；骨肉瘤 miR-93、miR-25和miR-106b 同属于miR-106b-25家族，有研究报道miR-93与很多肿瘤的发生，发展具有很强的关联性，如前列腺癌，肺癌，喉鳞癌，乳腺癌，胃癌，肝癌，直肠癌，T细胞癌等常见的癌症【1.2】。 本研究我们从临床手术收集13例典型骨肉瘤患者的活检组织样本，手术切除组织样本以及10例正常骨组织样本，记录患者年龄、性别、肿瘤位置等临床资料，着重探讨miR-93在骨肉瘤组织中的表达情况。 1实验材料 1.1 组织样本 本实验共纳入骨肉瘤患者13例，正常骨组织（来自外伤患者）10例为研究对象。骨肉瘤患者男性 9例，女性4 例，患者年龄8至54岁，平均年龄为18.74岁。所有样本获取均符合伦理委员会的相关规定。 1.2 主要仪器、器材，试剂 超净工作台，分光光度计，超低温冰箱，原位杂交试剂盒，探针等等 2实验方法 2.1 原位杂交 步骤： （1）取材（2）梯度脱水（3）浸蜡（4）切片（5）梯度酒精复水（6）孵育（7）胃蛋白酶消化（8）后固定（9）预杂交液（10）杂交（11）杂交后洗涤（12）滴加生物素化鼠抗地高辛（13）滴加鼠二抗（14）DAB显色（15）苏木精复染（16）梯度酒精脱水（16）中性树脂封片。 2.2 Real-time PCR 步骤： （1）组织总RNA的提取 （2）琼脂糖凝胶检测RNA的完整性： （3）cDNA的合成（逆转录反应） （4）实时定量PCR（Real-time qPCR） 2.3 统计学分析 实验所得数据均采用SPSS19.0软件进行统计学分析。根据具体情况分别采用两配对样本t检验，两独立样本t检验以及chi;2检验或四格表确切概率法。各检验结果均为Plt;0.05表示具有统计学意义，Plt;0.01表示具有显著统计学意义。 3结果 3.1 原位杂交结果 原位杂交结果表明：光镜下观察发现miR-93阳性信号主要定位于骨肉瘤细胞胞浆中。A组（新辅助化疗前骨肉瘤诊断性活检标本）中高表达10例，高表达率为76.92﹪；B组（新辅助化疗后骨肉瘤手术切除标本）中高表达4例，高表达率为30.77﹪；C组（正常骨组织标本）中miR-93高表达2例，其高表达率为20.0﹪。两两比较：A组mir-93表达高于B组，P=0.047＜0.05。差异具有统计学意义；A组mir-93表达高于C组，P=0.012＜0.05。差异具有统计学意义；B组和C组比较，P＞0.05。.差异无统计学意义。（图1-1，图1-2，图1-3） A组，新辅助化疗前诊断性活检标本；B组，新辅助化疗后手术切除标本；C组，正常骨组织标本（来自外伤患者）。 **表示差异具有显著的统计学意义，plt;0.01 Real-time PCR结果表明：A组（新辅助化疗前骨肉瘤诊断性活检标本）中miR-93表达CT值=8.19plusmn;2.0266，N=13；B组（新辅助化疗后骨肉瘤手术切除标本）中miR-93表达CT值=3.53plusmn;1.6740，N=13；C组（正常骨组织标本）中miR-93表达CT值=1.90plusmn;1.0329，N=10。两两比较：A组mir-93表达高于B组，差异具有显著统计学意义（配对样本t检验，Plt;0.01）；A组mir-93表达高于C组，