HBV一DNA定量检测与HBV血清标志物的相关性分析.docVIP

精品论文 参考文献 HBV一DNA定量检测与HBV血清标志物的相关性分析 宋林林 （山西省汾阳医院检验科 山西汾阳　032200） 【摘要】目的 探讨HBV- DNA荧光定量检测与HBV血清标志物定量检测结果并进行分析。方法 同时检测638份血清标本用时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）对乙肝五项定量分析；用实时荧光定量PCR技术(FQ)-PCR技术对HBV-DNA定量分析。结果 （1）组224例,HBV-DNA阳性率98.2%(220/224);（2）组40例HBV-DNA阳性率100%(40/40);（3）组220例HBV-DNA阳性率47.3%(104/220);（4）组82例,HBV-DNA阳性率53.6%(44/82);（5）组22例,HBV-DNA阳性率36.3%(8/22);（6）组34例,HBV-DNA阳性率17.6(6/34);（7）组12例和（8）组4例未检出HBV-DNA。结论 在各种HBV模式中,以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高。应用FQ-PCR定量检测HBV-DNA能准确地反映体内的HBV真实感染和复制情况,与TRFIA联合应用对乙肝的临床诊治和预后判定具有重要意义。 【关键词】　HBV 血清???志物 乙型肝炎病毒HBV- DNA 荧光定量PCR 【中图分类号】446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）29-0104-02 乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一,每年死于该病的有100多万人。乙型肝炎病毒感染可导致肝脏的炎症，称为乙型病毒性肝炎（简称乙型肝炎）。是威胁我国人群健康最重要的传染病之一。HBV的传播途径主要有密切接触传播，母婴传播，血液传播和性传播。HBV携带者和乙型肝炎患者的血液、唾液、精液和阴道分泌物等都可以成为传播源。80%-90%的人在感染HBV后不出现临床症状，少数感染后出现急性肝炎的症状，部分HBV感染者可发展为慢性迁延性肝炎或原发肝癌。乙型肝炎TRFIA检测项目主要包括两对抗原抗体（即HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAg），和一个抗体（HBcAb）。故友称为乙肝两对半或乙肝五项。它反映病毒感染人体后机体免疫的状态，在判断HBV感染的程度，用药的效果及预后判断中有一定局限。HBV－DNA的检测是HBV感染最具敏感性和特异性的指标，能反映病毒在体内复制的真实情况，本研究采用FQ－PCR和TRFIA对乙肝五项和HBV－DNA之间的相关性进行探讨分析，二者结合对乙肝的诊断治疗和预后评估提供实验的科学依据。 1　材料与方法 1.1　研究对象　638例实验标本来自2011年7月至2011年12月我院门诊病人,其中男性432例，女性206例,年龄5-69岁,平均年龄35.8岁。 1.2　实验仪器　上海新波生物技术有限公司提供的EFFICUTA全自动样本前处理系统，及ANYTEST2000时间分辨率荧光分析仪，荧光定量PCR仪为杭州博日FQD-66A定量PCR分析仪。 1.3　实验试剂　FQ-PCR试剂为中山大学达安基因股份有限公司生产的HBV-DNA荧光定量PCR诊断试剂盒，HBV-DNA的测定单位为拷贝/毫升,或Copies/ml。TRFIA试剂为苏州新波生物技术有限公司生产的乙肝五项诊断试剂盒。 1.4 实验方法 采用常规的高温裂解法对HBV—DNA进行定量测定,同时做阴性、临界阳性、强阳性质控品及室内质控。标准参照品浓度为生产厂家的试剂盒统一提供。HBV阳性定量参考品浓度为：1.0times;104IU/ml/管、1.0times;105IU/ml/管、1.0times;106IU/ml/管、1.0times;107IU/ml/管。A:标本的提取：取100ul血清加入等量DNA浓缩液充分混匀，12，000rpm离心10分钟；去上清，沉淀加20ulDNA提取液充分混匀，瞬时离心数秒；100℃恒温孵育10plusmn;1分钟；12，000rpm离心5分钟，分别加处理后的样品上清液及阳性定量参考品各2ul于反应管内，8000rpm离心1分钟进行PCR扩增反应。B:PCR扩增：93℃2分钟；93℃45秒rarr;55℃60秒rarr;10个循环；93℃30秒rarr;55℃45秒rarr;30个循环。FQ-PCR自动分析仪分析反应结果得出标本的乙肝病毒拷贝数。正常参考值为lt;1.00times;103拷贝/ml。ge;１times;10３IU/ml者为阳性，lt;１times;10３IU/mL者为阴性。 乙肝五项用时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）操作：所有操作严格按说明书进行，每次操作均带标准品，每个标准品均做双孔