DMBA诱导的不同生理阶段的SD大鼠乳腺癌病理特点.docVIP

精品论文 参考文献 DMBA诱导的不同生理阶段的SD大鼠乳腺癌病理特点 陈治 崔娜 张媛媛 王永和 陈宁 董楣（河北大学附属医院　河北保定　071000） 【摘要】目的 通过给予不同生理阶段（幼年、产后）的SD大鼠二甲基苯恩(DMBA)，明确不同生理阶段这一因素是否对SD大鼠乳腺癌的发生以及肿瘤的病理特点是否存在影响。方法　给予所有30只大鼠DMBA灌胃，将15只幼年大鼠分为对照组，15只成年产后SD大鼠分为实验组。对比两组之间乳腺癌的发病率、肿瘤直经、免疫组化结果。结果　对于幼年SD大鼠，DMBA诱导的不同生理阶段大鼠乳腺癌发病率、肿瘤直径及免疫组化结果均有差异，且有统计学意义（Plt;0.05）。结论　这一结果可以解释移居美国第二代乳腺癌发病率达到当地水平，而第一代却不受影响的主要原因：在于幼年时期较早的接触当地致癌因素。 【关键词】DMBA　乳腺癌　SD大鼠 本实验用化学致癌剂二甲基苯蒽(DMBA)诱发不同生理阶段大鼠乳腺癌动物模型。研究产后这一因素大鼠乳腺癌发生程中的干预作用。进一步明确乳腺癌的发生预防机制，早期干预防治，有针对性的降低乳腺癌的发病风险。 1　材料与方法 1.1实验动物及分组 实验用健康雌性SD大鼠及所需饲料均购自河北医科大学实验动物中心。大鼠质量为70g～100g，购入后适应性饲养1周，将产后鼠及幼鼠分别分为实验组和对照组，各15只。标准饲料分笼喂养，自由饮水。 1.2试剂及实验步骤 7，12-二甲基苯蒽（7,12- dimethylbenzanthracine DMBA）：美国Sigma公司生产，大豆异黄酮：华北制药厂生产。C-erbB-2、PCNA抗体为美国Zymed公司产品，硝酸银为中国医药公司上海试剂公司生产。 动物饲养地点为河北医科大学第四医院动物实验中心（SPF级动物试验室，P3级实验室），所有实验废弃物经实验室统一分类存储、处理。 1.3模型制作 所有大鼠经适应性饲养后，将DMBA溶于食用油中，按10mg/100g大鼠体重灌胃两次，间隔10天。所有大鼠分笼饲养，给予足量水及食物。 1.4观测指标及方法 1.4.1取材 饲养至第24周，于发情间期给予2%戊巴比妥钠3-5mg/100g体重腹腔注射麻醉。记录大鼠???腺癌发病率，测量乳腺肿物直径，将乳腺肿物及其周围约1cm范围皮肤组织一并切除。解剖大鼠乳腺肿瘤组织，常规固定并石蜡包埋，制成4mu;m切片，分别行嗜银染色及HE染色，光学显微镜下观察并计数细胞内核仁组成区嗜银蛋白颗粒数。AgNOR采用经典染色方法。PCNA及C-erbB-2用S-P两步法检测组织中的蛋白表达。 1.4.2指标检测方法 所有肿瘤组织均行HE染色确认。将切除肿瘤组织采用S-P法行PCNA、C-erbB-2染色。AgNOR采用经典染色法。多个乳腺肿瘤大鼠记录直径最大者，所有大鼠均经HE切片染色确认是否发病。 PCNA蛋白表达于细胞核，弱阳性呈淡黄色，中等强度表达呈棕黄色，强阳性表达呈棕褐色，在400倍光学显微镜下计数500个细胞/切片，按以下公式计算PCNA染色强度指数SII（staining intensity index）：（弱阳性细胞百分数times;1）+（中等强度阳性细胞百分数times;2）+（强阳性细胞百分数times;3）；0～50为（-）、51～75为（+）、76～100为（++）、gt;100为（+++）。本实验以（-）～（+）为阴性，（++）～（+++）为阳性。 C-erbB-2表达于细胞膜，表达强度按Hercep Test 评分标准，根据阳性细胞数及着色强度分为4级：（-）完全阴性；（+），超过10%的癌细胞胞膜染色，染色间断分布，未环绕胞膜；（++），超过10%的癌细胞胞膜弱到中度阳性，染色连续，环绕整个 胞膜；（+++），超过10%的癌细胞胞膜强阳性，染色连续，环绕整个胞膜；本实验以（-）～（+）为阴性，（++）～（+++）为阳性。 AgNOR在油镜下计数至少100个细胞，直径2.5～5mu;的团块按5个颗粒计算，5～10mu;m团块按10个颗粒计算，gt;10mu;m按15个颗粒计算。最后按单位细胞核内颗粒数计算最终平均值。 1.4.3统计学处理 使用SPSS10.0对所得数据进行处理，按alpha;=0.05标准用t检验 t＇检验、卡方检验和确切概率法进行统计分析。 2　结果 2.1大体病理及组织学观察结果