50例胃肠道间质瘤中c-kit基因突变的检测及意义.docVIP

精品论文 参考文献 50例胃肠道间质瘤中c-kit基因突变的检测及意义 张薇珊1 成元华2 张著学3 （1 四川省遂宁市中心医院病理科 629000） （2贵阳医学院附属医院病理科 550004；3贵州省人民医院病理科 550004） 【摘要】目的 探讨c-kit基因在胃肠道间质瘤（GIST）中的突变状况。方法 用PCR扩增和直接测序的方法,检测50例GIST中c-kit基因11号外显子突变。结果 50例GIST中c-kit基因突变率为54.0%。不同侵袭危险组、部位、年龄组、性别、组织学分型、有无坏死及是否浸润至邻近器官等之间比较c-kit基因突变率均无显著性差异（P＞0.05）。结论 c-kit基因突变参与了部分GIST的发生。 【关键词】 胃肠道间质瘤 c-kit基因 聚合酶链反应 突变 【中图分类号】R730 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）29-0097-02 胃肠道间质瘤（gastrointestinal stromal tumor,GIST）是人类胃肠道最常见的间叶源性肿瘤，c-kit基因及血小板衍生生长因子受体A（platelet-derived growth factor receptor alpha, PDGFRA）基因突变是GIST发生的分子生物学基础[1]。 1 材料与方法 1.1材料 收集遂宁市中心医院病理科2000年1月—2012年1月的胃肠道间质瘤50例，标本均为10%的福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋,HE染色，两位熟练病理医师复习切片。 1.2免疫组化 采用SP法，实验常规设置阳性对照及阴性对照，部分使用内对照。CD117、CD34、SMA、S-100、Desmin购自Dako公司，SP试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。CD117、CD34阳性染色定位于细胞质和（或）细胞膜，SMA、Desmin定位于细胞质，S-100定位于细胞质和（或）细胞核。 1.3诊断标准 50例GIST中，48例CD117阳性而确诊，2例CD117阴性者有1例因CD34阳性，SMA、Desmin和S-100蛋白阴性而确诊，1例 CD117阴性者因SMA、Desmin和S-100蛋白均阴性,排除了平滑肌源性和神经源性肿瘤,形态符合GIST而纳入本研究。 1.4 c-kit基因突变分析 用蛋白酶K-酚-氯仿方法提取GIST组织DNA。用PCR扩增c-kit基因第11外显子,引物序列分别为11F-CCAGAGTGCTCT-AATGACTG，11R-ACCC AAAAAGGTGACATGGA，产物长236bp。PCR条件为: (1)95℃变性2 min; (2) 94℃40 s, 54℃退火40 s, 72℃35 s;循环30～35次; (3)最后72℃延伸5min。扩增反应以双蒸水代替模板作为阴性对照。PCR产???在上海生物工程有限公司纯化并测序。有突变的病例再行反向测序证实,并与NCBI基因库c-kit基因序列进行比对。 1.5统计分析 采用SPSS 13.0chi;2检验。Plt;0. 05有统计学意义。 2 结果 2.1 GIST临床病理特征 50例GIST中，男性30例，女性20例，男：女=1.5：1；年龄24～77岁，中位年龄55岁，发病高峰年龄60～69岁（35.0%）。肿瘤位于食道1例，胃23例，小肠12例，结肠5例，直肠2例，肠系膜4例，腹膜后3例。依据Fletcher 2000年提出的GIST生物学行为分级标准[2], 50例GIST包括极低度侵袭危险性2例,低度侵袭危险性11例,中度侵袭危险性15例和高度侵袭危险性22例。 2.2 c-kit基因突变分析 50例GIST中27例检测到c-kit基因外显子11突变，突变率为54.0%；在48例CD117阳性的病例中，c-kit基因突变率达到了54.2%（26/48）；2例CD117阴性的病例，1例有突变。突变中均为杂合性突变，未见纯合性突变。突变形式有：16例缺失突变（59.3%），10例点突变（37.0%），1例缺失伴点突变（3.7%），突变集中在5prime;端累及密码子550～560的“热点”区。 最常见的形式是5prime;端第557～558个密码子WK(Trp-Lys)的缺失，共16例; 3例557密码子由TGGrarr;GGT，即Trp557rarr;Gly；1例557密码子由TGGrarr;AGG，即Trp557rarr;Arg; 2例559密码子GTTrarr;GAT，即Val559rarr;Asp；1例559密码子GTTrarr;GCT