影响山羊幼羔卵泡发育和体外受精效果主要因素得研究.pdfVIP

影响羔山羊超数排卵与体外受精发育效果因素研究 1 引 言 诱导羔羊卵泡发育 (简称“幼羔超排”) 技术是根据幼龄羔羊 (l~2 月龄) 卵巢对生殖激 素反应敏感，而发明的一项高效率生产羊卵母细胞的新技术。 在自然情况下，胎儿卵巢上的有腔卵泡开始出现大约在母羊妊娠期的 135 d，出生时 有腔卵泡数量明显增加[l] ，之后继续增加，于羔羊出生后 4~8 周龄达到高峰，以后随着青 春期的到来开始减少[2] 。由于4~8 周龄羔羊卵巢上的卵泡发育数量既不受出生季节和体重 影响，也没有成年羊卵巢上卵泡优势化的现象发生[3] ，因此对这个阶段羔羊进行超排是一 项高效率生产卵母细胞的新途径，并可以将幼羔超排技术与体外胚胎生产及胚胎移植技术 相结合，快速繁殖有重要经济或遗传价值的动物[4] 。然而，由于4~8 周龄羔羊垂体机能尚 未健全，不能分泌足够量的促性腺激素刺激卵巢活动，卵泡不能最终发育成熟排卵，因此 需要利用活体采卵技术采集卵母细胞。 1.1 诱导羔羊卵泡发育及体外受精技术研究意义 自然情况下，成年羊不经激素处理活体采卵每次平均仅能获得 3.6~6.6 枚可用卵母细 [5] [6] 胞 ，经生殖激素处理每次平均能获得 10~20 枚 ，而每只幼龄羔羊用生殖激素诱导卵泡 发育可获得 80~160 枚可用卵母细胞[4,7] ，因此，如果将幼羔超排技术与羊体外受精技术、 胚胎移植技术进行组装集成 (简称JIVET 技术，juvenile in vitro embryo transfer) 运用于养 羊生产，可将羊的繁殖效率较常规胚胎移植提高约20 倍，较自然繁殖提高约60 倍，并使 世代间隔缩短到正常的 1/3~1/4，这将充分挖掘和利用优良母羊的早期繁殖潜力，大大加快 羊育种及品种改良进程，同时也将解决羊胚胎移植商业化所需胚胎来源匮乏及胚胎生产成 本昂贵的问题，将大大促进胚胎生产的商业化应用，应用前景十分广阔。另外利用幼羔超 排技术可探索卵子发生及卵泡发育调控机理，为动物克隆、胚胎干细胞、转基因和卵子库 建立等其它生物技术提供丰富的试验材料和必要的研究方法。 1.2 诱导羔羊卵泡发育方法研究进展 1.2.1 孕酮栓+激素方法 该方法是将孕酮以栓剂形式放置阴道内一定时间后再用促性腺激素刺激，然后撤掉孕 酮栓，再进行卵母细胞采集。Ledda 等对30~40 d 的羔羊进行激素处理：给羔羊埋栓 (为成 年羊用栓 1/6 尺寸) 6 d ，撤栓前36 h 一次性分别注射 120 IU GnRH 和400 IU PMSG 。撤栓 24 h 后采卵，每只羔羊平均得到86.2±7.9 枚卵母细胞，成熟率为77.9%[8] 。Ptak 等给 1 月 龄的羔羊放置孕酮栓 8 d ，第5 、6 、7 d 每天早晚两次注射2.7mg FSH,第8 d 撤栓采卵得到 约29 枚卵母细胞，49.8%培养到成熟，囊胚率为22.9%[9] 。Morton 等通过性别分离的精子 与羔羊卵母细胞受精并结合胚胎冷冻方法研究体外胚胎生产时，对羔羊超数排卵采用如下 方法:先给3~4 周和6~7 周供体羔羊注射50 µg 安息香酸雌二醇，48h 后将二分之一的含有 1 河北农业大学硕士学位（毕业）论文 3.0mg 的18-甲炔诺酮栓埋植10 d，在理植第7 d 时肌肉注射400IU PMSGM 和一支50mg [10] 猪促性腺激素(p-FSH ) ，两天后再肌肉注射一支40mg p-FSH ，结果得到两只羔羊 。 1.2.2 促性腺激素处理方法 张锁链等以FSH 或FSH-LH 四种不同处理方法对29 只68~110 日龄羔山羊进行处理， 结果表明采用FSH-LH(肌注)进行处理得到的卵子经体外受精后，其卵裂率明显高于其它方 法得到卵