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胃腺癌组织差异表达蛋白质的分离与鉴定 摘要 近年来，高通量的基因组学技术使我们对肿瘤相关的基因有了深入的了解。 但是，这并不足以使我们能够在分子水平对肿瘤发生的机制进行深入的剖析，基 因组学技术无法对肿瘤蛋白水平、转录/转录后修饰以及蛋白—蛋白相互作用进 行监测[1]。因此，有必要利用蛋白质组学技术对肿瘤相关的蛋白进行细致的研 究。作为蛋白质组学的核心技术之一的双向凝胶电泳 （2-DE ）是 1975 年由 0’Farrell 等[2]首先发明的，其基本原理是利用蛋白质的等电点和分子量的不 同而将它们相互分离。利用2-DE 对肿瘤与正常组织差异表达蛋白质进行分离和 鉴定，有助于寻找肿瘤的特异分子标志物，可作为一种潜在的诊断工具。 胃癌是一种常见的恶性肿瘤，其死亡率在所有恶性肿瘤中排第二位，世界上 每年大约有75 万人死于胃癌[3] 。造成胃癌死亡率高的原因主要是其早期诊断率 非常低，只有不到一半的患者能够在早期胃癌时被诊断。据 AJCC 的调查，IV 期胃癌患者的5 年生存率只有7%到10.1%，而早期胃癌（IA 期）患者的5 年生 存率可达78%到93.3%[4, 5] 。因此，提高早期诊断率对改善胃癌患者的预后十分 关键。利用蛋白质组学的技术对临床的肿瘤标本进行研究，可以发现肿瘤相关的 分子标志物。这类标志物既可以作为研发新的早期诊断方法的基础，也可以为了 解肿瘤发生、发展的分子机制提供线索。 胃腺癌是胃恶性肿瘤中最常见的病理类型，大约占其90%以上。我们希望通 过对胃腺癌及正常胃组织双向电泳的技术进行优化，提高对碱性区域和低丰度蛋 白的分离、检测，改善胃腺癌及正常胃组织蛋白质图谱的分辨率。在本研究的第 一部分中，我们利用4 个pH 范围梯度重叠的IPG 胶条对临床获取的胃腺癌及正 常胃组织进行 2-DE，分别获得了各自的总蛋白图谱。通过分析胃腺癌及其配对 正常胃组织的2DE 图谱，共找出115 个差异表达蛋白点。在研究的第二部分中， 通过对着115 个差异蛋白点分别经MALDI-TOF-MS 质谱鉴定和数据库检索，共 鉴定出70 种差异表达的蛋白质。其中包括钙结合蛋白、波形蛋白、过氧化物歧 化酶、α-烯醇酶、钙调理蛋白等27 种在胃腺癌组织中高表达的蛋白质和43 种 3 在胃腺癌组织中低表达的蛋白质如前胃亚蛋白酶、腺苷脱氨酶、 二甲基精氨酸 二甲胺水解酶、黄曲霉毒素B1 醛还原酶、细胞色素C 氧化酶亚基5B 等。在第 三部分的研究中，我们利用western blotting 的方法初步验证了AKR7A3 在胃腺 癌中表达下降。而 AKR7A3 的表达水平与胃腺癌的关系有待大规模的免疫组化 实验（组织芯片）进一步确定。 关键词：胃腺癌，蛋白质组学，双向电泳，质谱，AKR7A3 4 Separation and identification of differentially expressed proteins of gastric adenocarcinomas tissue Abstract In recent years, we have in-depth understanding of tumor related genes due to the high-throughput genomics technology. Although, it is not enough to enable us to analyzes the mechanism of tumorigenesis at the molecular level deeply, since the genomics technology cannot monitor the transcription/post-translational modifications and protein-protein in