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一起学校 B型流感暴发的实验室检测 　　【摘要】 目的 了解南平地区浦城县一起流感暴发疫情，通过实验室检测分析确定病原，为今后有效开展流感实验室工作提供依据。方法 通过流行病学调查，结合荧光定量PCR快速诊断检测和流感病毒分离实验室检测进行综合分析。结果 荧光定量PCR快速诊断检测8例病人咽拭子，阳性8 例，均为 B型，阳性率为 100% 。 流感病毒分离鉴定检测 8例，第一次培养 7例阳性，分离率由87.5%（7/8）。只有1份为阴性，将阴性标本做第二次重培养，才出现阳性，均为B型（Victoria系），病毒培养分离率上升为 100%（8/8）。结论 本起流感疫情共发病76例， 罹患率为10.8%（76/706）。我们采集病人咽拭子，进行荧光定量PCR快速诊断检测和细胞培养分离流感病毒鉴定，确定为B型维多利亚株引起。此次疫情结合荧光定量PCR和细胞培养分离病毒的方法，用核酸快速检测结果指导细胞培养分离病毒，提高了阳性检出率。较传统方法大大保证了检测的时效性，而对基层疫情确定及时有效处理控制发挥了重要的指导意义。 　　【关键词】 流感；暴发；实验室检测 　　2012年春季，南平地区浦城县某学校发生集体性发热事件 ，经流行病学调查，结合临床表现判断为疑似流感暴发。为确定引起暴发的病原，以便为采取有针对性防治措施提供依据，我们采集病人咽拭子，进行荧光定量PCR快速诊断检测和细胞培养分离流感病毒，现将疫情调查处理情况和实验室检测进行分析如下： 　　1.流行病学调查 　　1.1发病情况 　　2012年 2月 1-18日，浦城县某学校发生以发热、咳嗽、咽痛、流涕等为主要症状的流感样疫情，全校共706人，共发病76例， 罹患率10.8%（76/706）。其中确诊病例8例，临床诊断病例68例。首发病例患者于2月6日出现发热（T39℃），咳嗽、咽痛、流涕、喷嚏伴腹泻，末例到6月17日，发病高峰时间在2月12日-2月14日，占全部病例数的73%。2月14日下午学校采取调课措施后，病例迅速下降，2月16省市疾控调查组介入调查，至18日已无新病例出现。疫情得到有效控制。 　　1.2临床表现 　　主 要为发 烧 （76例均有发热其中3例超过 40℃）、咳嗽（76例）、流涕（53例）、咽痛（48例）、头痛（32例）。76例病例中，大部分病例临床症状普遍轻微，均居家进行治疗，病程一般为 3～5天左右，患者均无肺炎等并发症，无住院病例。 　　2.实验室检测 　　2.1 材料 　　2.1.1 标本采集 由浦城县CDC用 DMEM液采集典型病例咽拭子 8人份.冷藏保存送到实验室，进行荧光定量PCR快速检测和病毒分离，不能立即分离的置一75℃保存。 　　2.1.2 标准血清A/天津津南/15/2009（H1N1）、A/福建同安/196/2009（H3N2）、A/四川/SWL1/2009、B/重庆渝中/1384/2010（Victoria）、B/四川安岳/139/2011（Yamagata） 由国家流感中心提供 。 　　2.1.3 MDCK细胞培养： 用常规胰酶消化细胞传代，DMEM培养液含1O%小牛血清。 　　2.1.4 1.5%人红血球悬液：用 Alsever氏血球保存人红血球。用前以PH7.4的PBS洗 3次（前2次1200 r/min离心5 min，末次经 1200 r/min离心 lO min），最后用PBS配成1.5%浓度 。 　　2.1.5 六孔塑料板、2O～200 移液器。 　　2.1.6荧光定量RT-PCR快速诊断试剂：QIAamp Viral RNA Mini Kit试剂盒（QIAGEN公司），荧光PCR法甲型和乙型流感病毒核酸测定试剂盒（上海之江生物科技股份有限公司） 。 　　2.2 方法 　　2.2.1荧光定量RT-PCR快速诊断检测使用QIAamp Viral RNA Mini Kit试剂盒（QIAGEN公司），提取病毒核酸后，采用甲型和乙型流感病毒核酸测定试剂盒（上海之江生物科技股份有限公司） ，进行荧光定量PCR扩增检测。 　　2.2.2流感病毒分离采用组织培养技术，按《2011流感监测技术指南》将传代狗肾细胞（MDCK cells）经胰酶消化后分铺细胞六孔板上，细胞长成单层后，每份标本接种 2个细胞孔，在35℃含 5% 二氧化碳培养箱培养，7 d后收集细胞液，用1.5%新鲜人“0”型红细胞作血凝（HA）试验，作为初筛[1]。HA阳性标本用国家流感中心提供的标准血清A/天津津南/15/2009（H1N1）、A/福建同安/196/2009（H3N2）、A/四川/SWL1/2009、B/重庆渝中/1384/2010（Victoria）、B/四川安岳/139/2011（Yamagata）做红细胞