aiv地方分离（h9n2）ha和na基因克隆、序列分析及ha的原核表达.pdf

摘要 Jan 禽流感(Av Influenza，AI)是由正枯病毒科A型流感病毒引起的传染性疾病 综合征。低致病力禽流感常引起呼吸道症状，产蛋量下降。1994年首次报道HgN2AIV 在中国流行，并且已成为中国现有AIV的主要亚型。近几年发现，H9N2AIV不仅感染 禽类，还感染猪和人。因此，开展对禽漉感病毒H9N2亚型的研究，从分子水平掌握AlV H9N2亚型的流行规律，不仅在病毒学、兽医学等学科上有重要的学术意义，而且在公 共卫生等方面也具有重大的社会意义。 中增殖，提取核酸，根据AIV8个基因片段的3’末端高度保守的核苷酸序列特点，设 AIV 计一条反转录引物．根据GenBank已发表的H9N2HA基因和NA基园cDNA序 载体上。序列测定及分析结果为，HA基因eDNA包含完整的开放阅读框架，全长为 320个氨基酸，HA2 1707bp，共编码560个氨基酸，其中信号肽18个氨基酸，HAl IGLF， 间，氮基酸同源性在87．5％一97．9％之间。裂解位点附近的氮基酸序列为RSSR 符合低致病力禽流感病毒的分子特征。因此，从分子水平证实，MJ00毒株为低致病力 的24株毒株的核苷酸同源性在82．5％一98，9％之间．氮基酸同源性在85．7％一98％之间。与 香港和内地流感毒株相比．MJ00NA的茎部没有3个氨基酸残基的缺失。 将HA基因亚克隆到原核表达载体pGEX．6p．1中，将鉴定为阳性的重组质粒转化 大小为26ku)融合后大小约为88ku，目的蛋白分子量约为62ku，与理论值相符。 本实验首次克隆并获得了中国地方分离株MJ00的HA和NA全基因序列，并对 HA基因进行了原核表达，为制备基因工程疫苗、重组疫苗来预防禽流感提供了一定的 理论基础。 关键词禽流感病毒：HA基因：NA基因；克隆；原核表达 ，， ，，』耋些奎兰至茎鹜薹堡坚，一。一!—一，一 CLONING ANALySISAND SEQUENCE EXPRESSIONOF AvIAN LOCALISOLATEOF INFLUENZAHAANDNAGENE Abstract of Avian causedA avianinfluenza member influenza(AI)WaS virus，a by type influenzawith virulenceWaScharacterized low OnhomyxoVir．dae．Avian byrespiratory andlow influenzaH9N2 haSbeenamain in symptom productirity,Aviansubtype subtype was human itof Chinasinceit in1 caninfectflowand and 994，which reported pig being．So interestto Avian