bvdv自体蛋酶p20和核心蛋白p14基因的克隆及原核表达.pdf

摘要 牛病毒性腹泻一粘膜病病毒(Bovineviraldiarrhea-mucosaldisease 黄病毒科、瘟病毒属(Flaviviridae 膜病(BVD-MD)。表现为腹泻。急、慢性粘膜病，持续性感染与免疫耐受，免疫抑制， 母畜流产、死胎和畸胎等。该病呈世界范围分布，严重危害养牛业的发展。 白酶蛋白和结构蛋白核心蛋白，核心蛋白P14具有抗原性，而自体蛋白酶P20的抗原性 并将其在原核系统中表达，旨在为基因工程诊断抗原的研究奠定基础。同时为P20蛋白 抗原性的阐述作一必要铺垫。 根据GenBank中BVDV OregonC24V株基因组序列设计二对引物，应用RT-巢式 载体，序列测定及同源性分析表明，BVDVOsloss．Like株P20基因与BVDVVEDEVAC 据这一结果。参考GenBank上发表的BVDVOsloss株基因组序列设计一对引物，扩增 P14基因，并进行序列测定及同源性分析，结果表明BVDV BVDV C24V 1)、Oregon 79．41％、78．76％。系统发生分析结果表明BVDV VEDEVAC株亲源关系较近。 利用DNA重组技术，将BVDVP20和P14基因各分别亚克隆至原核表达载体 plysS和DH5a具有毒性。 关键词BVDV；P20基因：P14基因：克隆：原核表达 CLONINGANDPROKARYOTIC OFBVDVAUTOPROTEASEP20AND COREPROTEINP14GENE ABSTRACT Bovineviraldiarrhea-mucosaldisease the member virus∞VDV)representedprototype ofthe viral causedbovine pestivirnsgenus，familyFlaviviridae，mainly disease．Bovine；nfectedBVDVshowed andchronicmucosaldiaease． by diarrhea,acute infectionand persistent COW abortion，dead fetusandabnormal was fetus．BVDVaworldwide incattlewhichhadnotbeen pathogen controlledclassicalvaccination，andhad thecattleherds． seriously by endangered BVDVP20andP14 locatedfnthe of gene 5’endthe genome．encoded of and structuralofc