bvdv囊膜蛋e0、e1和e2基因的克隆及原核表达.pdfVIP

摘要 摘要 viraldiarrhea-mucosaldisease 牛病毒性腹泻．粘膜病病毒(Bovine virus，BVDV)是黄病 毒科、瘟病毒属(Flaviviridae 症状为腹泻，急、慢性粘膜病。持续性感染与免疫耐受，免疫抑制，母畜流产、死胎和畸胎 等。该病主要发生于牛，犊牛更易感，还可感染其它动物及人。牛病毒性腹泻粘膜病是全球 性传染病，具有较高的感染率，我国二十几个省市自治区均存在本病。且在各易感动物群中 的感染已呈日益扩大趋势。且常规的BVDV疫苗不能提供有效的保护，因此从分子生物学水 平上对该病原进行研究具有重要的意义。 BVDV E0、E1和E2基因位于基因组5’端的三分之一部分，分别编码病毒的结构蛋白(囊 膜蛋白EO、El和E2)，囊膜蛋白EO和E2具有抗原性，而E1的抗原性未见有报道。 根据GenBank中BVDV Osloss株基因组序列设计一对引物，应用RT-PCR方法体外扩增 (AJl33738)、SDI(M96751)及Oregon 为99．41％～80．91％。根据这一结果，参考GenBank上发表的BVDVVEDEVAC株基因组序列 设计二对引物，应用RT-巢式PCR(RT-nested PCR)方法扩增E2基因，并进行序列测定及 Osloss(M96687)、SDl(M96751)、Oregon 的BVDV VEDEVAC株基因组序列设计一对引物．扩增E1基因，并进行序列测定及同源性 分析，结果表明BVDVVEDEVAC．Like株El基因与BVDV (M96687)、SDl(M96751)、Oregon 同源性分别为100％--76．75％。系统发生分析结果表明BVDV E2基因与VEDEVAC株亲源关系较近。 利用DNA重组技术。将BVDV E0、El和E2基因分别亚克隆至原核表达载体pGEX石P．1， pGEX-6P-E2均得到成功表达。本研究克隆BVDVE0、El和E2基因，并将其在原核系统中 表达，旨在为基因工程诊断抗原和亚单位疫苗的研究奠定基础，同时为El蛋白抗原性的阐 明提供必要物质基础。 关键词BVDV：EO基因；El基因；E2基因；克隆；原核表达 V AND CLoNINGPROKARYOTIC OFBVDVENVELOPEPRoTEINS EO、E1ANDE2GENE ABSTRACT Bovineviraldiarrhcalmueo女a[diseasethememberofthe virus田VDV)is pestivirusgenus， causedbovineviraldiarrhea-mueosaldisease．Bovineinfected familyFlaviviridan，mainly by BVDVshowed andchronicmucosai infectionand diarrhea,acute diaease，pemisteot fetusand COW abnormalfetus． immunotolerenee，immunosupression，pregnantat,ortion，dead c8州