ajv-hf21毒株感染的df-1细胞中nalp3和mda5的转录水平.pdf

万方数据 摘要 天然免疫系统通过表达不同的模式识别受体(patternrecognitionreceptors， PRRs)特异性地识别入侵的病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)，发挥级联信号转导作用，从而达到抗病毒免疫防御作用。MDA5 NALP3 I Retinoicacid-inducible 和 分别为模式识别受体维甲酸诱导基因 样受体家族（ gene I-like receptors，RLRs）家族和核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族 （Nucleotide-bindingoligomerizationdomain-likereceptors,NLRs）亚家族中的重要成 员。它们能够识别RNA病毒，并调节细胞因 ，发挥非特异抗病毒作用。 亚群禽J 白血病（AvianleucosisvirussubgroupJ,ALV-J）是近年来受到广泛关注的禽白血病 的一种，感染该病毒的鸡往往会发生免疫抑制，导致机体的免疫应答受阻。本研究 NALP3 MDA5 ALV-J 为了解鸡模式识别受体 和 在 感染细胞中的作用，本研究通过 在对一株ALV-J野毒株的分离、鉴定及其env基因遗传进化分析的基础上，建立了 检测ALV-J 病毒感染DF-1 细胞诱导NALP3 和MDA5 的表达的实时荧光定量 RT-PCR NALP3 MDA5 ALV-J 方法，为进一步探讨 和 受体抗 感染的免疫通路奠定 基础。 首先，本实验室从安徽省合肥市某蛋鸡场疑似感染ALV-J 的鸡群中分离并鉴定 1 ALV-J 了 株 。患鸡精神沉郁，明显消瘦，皮肤苍白。经过剖检，发现肝脏、脾脏、 卵巢明显肿大，其中肝脏表面有大量白色肿瘤小结节。采用组织研磨、过滤方法， 将肝脏病料液接种鸡胚原代成纤维细胞和DF-1细胞系，提取培养7d细胞的总RNA DNA H5/H7 env PCR 545bp 和 ，利用 特异性引物和 基因引物进行 扩增后，分别获得 和2106bp大小的目的条带，将两个片段分别插入pMD-18T载体中，转化于E.coil DH5α大肠杆菌并挑取阳性克隆进行测序。结果表明，本实验室成功分离了一株引 发多种组织肿瘤的临床分离毒株，命名为AJV-HF211。通过DNAMan软件对国内 外已报道的14株ALV-J进行同源性分析，结果表明，AJV-HF211毒株与这14株同 源性为88.8%~94.0%，其中与国内广东分离株GD1109 同源性为94.0%，同源性最 高，亲缘关系最近。AJV-HF211毒株与英国原毒株HPRS-103 的同源性仅为89.3%， 不在同一分支，亲缘关系相对较远，表明AJV-HF211在遗传进化过程中存在较大的 变异。 NALP3 MDA5 SYBR 其次，本研究通过设计 和 两种受体的特异性引物，建立 Green Ⅰ实时荧光定量检测NALP3和MDA5受体转录水平的方法，并用该方法检 测了AJV-HF211毒株感染DF-1细胞后不同时间段内两种受体mRNA 的转录水平。 结果发现，与未感染的对照细胞相比，AJV-HF211毒株感染的DF-1细胞内NALP3