asia ⅰ型蹄疫抗原单抗elisa检测方法建立及疫苗种毒的分子鉴定.pdf

摘 要 B／c 采用蔗糖密度梯度离心法纯化灭活Asial型(新疆毒株)口蹄疫病毒146S抗原，免疫BAI 小鼠．融合脾细胞与SP2，o骨髓癌细胞，使用间接夹心ELISA方法筛选，获得4株可稳定分泌抗 养上清抗体效价可达l：20000以上，腹水抗体效价可达hl旷以上；g．E筘10细胞培养上清抗体 效价也可达l：5，120以上，腹水抗体效价可达1：81,920以上。四株单抗的亚型分别是l乜3C2、 纯，需要进行亚克隆，以提高纯度。四株单抗均有中和能力，其中8％cIo单抗中和能力最弱。 均具有很好的型特异性。 用该方法测定了AsiaI型病毒灭活抗原，O型病毒灭活抗原、正常BHK2I细胞培养液．结果表明 该方法特异性好，所测定OD值和AsiaI型抗原稀释倍数呈明显线性关系。采用该方法对ll批 Asia l型、O型单价或双价成品疫苗破乳抗原进行了测定，结果表明不同批次不同企业生产的疫 苗完整病毒颗粒抗原含量有差异，进一步完善有望用于成品AsiaI型口蹄疫疫苗中有效颗粒抗原 含量的测定，从而发展成为一种疫苗效力检验替代方法。 采用I愀R技术，扩增测定了制苗种毒(新疆株和LC株)VPI基因序列，对生产企业制苗 种毒进行了“身份”鉴定，结果表明各企业均以规程批准的制苗毒株生产疫苗。同时与我国目前 AsiaI型主要流行毒株(江苏株)VPI核苷酸序列及推导氨基酸序列进行了比较，结果表明，新 疆株对江苏株的核苷酸同源性为84．4％，氨基酸同源性为896％：LC株与江苏株的核苷酸同源性 为84．4％，氨基酸同源性为90．∞缸新疆株与LC株的核苷酸同源性为83．4％，氨基酸同源性为 87．2％。通过对两个疫苗毒株的VPI基因及推导氨基酸序列的分析，发现两个疫苗株与流行株(江 苏株)不属于同一基因型(VPI核苷酸序列同源性85％为同一基因型)，新疆株和Lc株的VPI 两者的RGD基序均未发生改变，其利用整联蛋白途径来识别宿主细胞位点能力也未发生变化． 因此使用这两个疫苗种毒株制备出的疫苗能否完全保护当前主要流行毒株(江苏株)，还有待进 一步的研究． 关睡葡。口蹄疫病毒，单克目吲‘体，146S，Pea,f,EU弘，RT-PCR Ⅱ ABSTRACT sucrose to 146S Asia Taking des时gament pure antigen cenU蛐method oftypeI(x蛳ia鸣 vaccine foot-and-mouthdisease immunized andfuse the suaim)inactivated virus,then mouse(blab／cl cellswiththe cell SP2／0 line mycloma spleencells,aflerscreeningbyIS-ELISA,向Ⅲhybfiaoma monoclonal AsiaI againsttype 辩删I塔stably antibody FMDV、帐pf印a吼Byiaen心ymg，the IS-ELISAtitersofculture andascitiesto and mnot antibody supematant ImG犯,2、粕689loc2Gl sub