RP-HPLC法测定BYZX和P-糖蛋白的相互作用.pdfVIP

I汪．HPLc法测定BYzx与P．糖蛋白的相互作用 夏宗玲。姚彤炜’，曾苏(浙江丈学药学院．杭州31003” 阿尔次海默病(简称AD)叉称老年痴呆症，是自动进样器，c1311A四元泵，G1315BDAD检测器 一种不可逆的、渐进性的脑功能障碍，临床表现为记 和chⅧstations处理软件(安捷伦科技有限公司)； 忆障碍，智力减退并伴有其他认知功能损害w。 如ⅡanMRl822自动高速冷冻离心机(日本日立公 BYzx[(E)．2一(4．((dienlyl舢ino)methyl) benzyⅡdene)-5，6．dimethoxy_2，3-dihydroinden—om】 为茚酮类化合物(其结构如图1)，系我校药物化学 研究室合成的用于治疗阿尔茨海默病的胆碱酯酶 混合器(上海精科实业有限公司)。 (AchE)抑制剂，能够增加大脑乙酰胆碱含量，是治 BYZx和多奈哌齐由我校药物化学研究室提 疗早、中期老年性痴呆的有效化台物“1。 供；维拉帕米购自中国生物制品检定所；BcA蛋白 测定试剂盒购买于碧云天生物技术研究所；RMPI· l“o购自cjbco公司；新生小牛血清购自杭州四季 青生物工程材料研究所；胰蛋白酶购自上海生工生 物工程公司；强tonx-100购自华美生物工程公司； 所用乙腈、甲醇均为色谱纯，其余试剂均为分析纯， H窖lCllemicalstnlctu珥5ofBYZX 实验用水为18Mo水(英国ELGA纯水仪)。 P一糖蛋白(Pho印ho—91ycoPro￡ein，P-gp)由人类 I．2色谱条件 多药耐药基因一1(MDR-1)编码，是由一种能量依赖 性外排泵，人P．糖蛋白不仅存在于肿瘤细胞而且在 mm mm×4．6 mmol-L“ i．d．。5“m)，乙腈：10 肾脏，肝脏，小肠和大肠，脑，睾丸肾上腺及怀孕子宫 等正常组织中也有表达”…。P．gp可以将生物毒性 为流动相。检测波长：325nm，流速为lmL·min～， 物质包括多种药物单向泵出细胞，有效地抑制外源 物的吸收、帮助消除而达到机体的保护作用。而药 iI)为内标。 物作为一种外源物。若是P-糖蛋白的底物．同样会 1．3 Bcap37及Bcap37／MDRl细胞的培养 被泵到细胞外影响其吸收．同时若和其他P-糖蛋白 底物合用还会产生P-糖蛋白水平的药物相互作用， 引起药动学及药效学的改变。近年来很多文献报道 饱和湿度的条件下培养，细胞贴壁生长。当细胞达 P．gp和cⅥ】3A4在成熟肠细胞中接近的表达位置 到90％汇合时，用0．25％胰酶消化，传代。 以及两者特异底物的广泛重叠，使它们在功能上可 1．4样品处理方法 能是协同的，形成一道日艘药物肠道吸收的屏障，在 将细胞裂解液收集于1．5mL的e娲ndorf管中， 临床中不难见到一些同时是cYP3A4和P．糖蛋自