HPLC法同时测定款冬花中9个主要成分的含量.pdfVIP

2013年《药物分析杂志》优秀论文评选交流会论文集 一151一 便，分离效果、重复性、稳定性及信息的完整性都好于其他方法。此方法可作为多糖的单糖组成分析的 最佳测定方法。试验中对反应条件进行了考察。 3．1．1 衍生化温度的考察 分别选取了60℃、70℃和80℃进行衍生化，发现60℃时衍生化不完全， 70℃以上反应衍生化程度变化不大，说明70℃时基本完全，不需要更高的温度，因此选取此温度进行衍生 化处理。 3．1．2 min的3个衍生化时间，发现加热时间 衍生化时间的考察 试验中选取了30min、45min和60 min。 越长，有些峰反而降低，而且衍生化时间为30min时的峰形较好，因此，选择衍生化时间为30 3．1．3加入盐酸中和的量的考察PMP衍生物的化学结构中含有碱性基团，因此，在萃取前加入的盐酸量 对萃取过程中损失情况有一定的影响，若加入的盐酸量过少，pH较高，糖的PMP衍生物在三氯甲烷中有一 定的溶解度，在萃取中的损失较显著。因此，试验中应使用等当量的盐酸中和反应液中的氢氧化钠。 3．2 色谱条件的选择 3．2．1 6．8)一乙腈(85：15)，流动相B为 流动相 参考文献[6]，本试验对流动相A为磷酸盐缓冲液(pH min，流动相 磷酸盐缓冲液(pH6．8)一乙腈(60：40)的系统进行了优化，尝试了3种梯度洗脱程序：①0～30 min， min，流动相A由100％_84％；20—60 A由100％粕0％；30～40min，流动相A仍为80％；(即一20 min，流动相A由84％_+60％。 流动相A由84％“0％；③0～10min，流动相A由92％_84％；10～50 结果采用梯度程序③进行洗脱，其分析结果较理想，各峰之间分离度较好。无论色谱峰的分离度还是色 谱峰在0．60min内的分布，结果均与指纹图谱技术要求相符合，故选定此程序为银耳多糖特定图谱梯度 洗脱程序。 3．2．2 ZORBAXXB 色谱柱 试验中在其他色谱条件相同的情况下，曾考察Agilent EclipseC。8色谱柱、 SHIMADZUVP—ODS Smart C18色谱柱、VertexAQ—c18 C】8色谱柱、GraceC18色谱柱、PhenomenexHyperClone 色谱柱。结果显示，Vertex AQ—C。。色谱柱基线分离较好，峰形对称性好。 3．3小结指纹图谱的相似性是通过色谱的整体性和模糊性来体现的，在不完全清楚样品的所有成分时， 指纹图谱相似性的评价可以反映其内在质量的均一性和稳定性。但是，在整体图谱相似性良好的情况下， 样品所含有效成分的含量仍然可能存在较大差异。因此，有必要在特定(指纹)图谱评价基础上尽可能增加 有效成分的含量测定，进一步评价药品质量。 参考文献(略) (本文发表于《药物分析杂志)2012，32(1)：136) I-IPLC法同时测定款冬花中9个主要成分的含量 李玮，杨秀伟 (北京大学药学院天然药物学系，天然药物及仿生药物国家重点实验室，北京100191) 摘要 目的：建立HPLC—DAD法同时测定生药款冬花和蜜炙款冬花中绿原酸、反式咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、反式阿魏酸、4， 5—0一二咖啡酰基奎