HPLC联用生物活性检测筛选中药抗氧化成分.pdfVIP

M1、M2、H质控品各3份，分别考察样品反复冻融 按以上样品处理方法和色谱条件对1名受试者 d．室温放 各个采样点的血浆分别进行测定，用标准曲线求出 O，1．2次，一30℃冰箱保存1，7，14，2l，28 置o，2，4，6h的稳定性和处理后革取物放置O，2，8， 血药浓度，见图2。 20 h、进样室放置O，5，10h的稳定性。经测定，其结 果基本保持不变(RsD(10％)。 2．3样品分析 “2，2”项条件的对照样品、空白血浆及样品的 色谱图见图1，结果表明，内源性物质不干扰测定。 圈2鸢尾苷元磺酰钠药·时曲线 三四兰匹蝈三 参考文献 【l】zHoNG 8 。 5MilIn0”。；m：h6 。2M刍0。 O)：343，346． 图1空白血象(。)、对照品(b)和孟浆样品(。)曲0诸囤 HPLC联用生物活性检测筛选中药抗氧化成分 李苏颖，李绍平‘(澳门大学中华医药研究院，澳门) 1．1仪器 细胞中的氧(O：)在转变成水(H：0)的过程中， 会产生许多活性氧(RoS)。其中大部分活性氧在到 达H，0之前，都会得到很好保护，但总有少数活性 (Agiknt 氧(2％一5％)在反应过程中泄漏出来，成为多余的Du—640(Beckmancoul￡er。USA)。 氧自由基，从而导致组织伤害，乃至诱发各种疾病和 1．2药材与试剂 促使机体衰老…。据报道，由自由基引起的疾病包 当归(A昭战m面lem如)挥发油购于广东合诚三 括癌症、心脑血管疾病、糖尿病、溶血性疾病等100 先生物科技有限公司，为超『临界二氧化碳萃取 多种”J。随着对氧自由基与疾病关系的理论研究 不断深入，抗氧化剂的应用价值日益受到重视”1。 郁金科技开发有限公司；莪术(凸，ⅢMW叩彬Ⅱ)挥 但是，越来越多的研究也证实了现在使用较多的合 发油购于浙江天瑞药业有限公司。 成抗氧化剂的毒性和致病性，因此众多研究者注目 色谱级甲醇和乙醇购于弛rck(DBrⅡIs刚t，德 于从丰富的中草药资源中来寻求高效、低毒的天然 bia∞d 抗氧化剂。 M∞teneg∞)o 抗氧化剂的体外活性测定方法有很多种”…。 抗坏血酸(Vc)购于Si鲫a(sLkuig，MO，美 天然抗氧化剂的一般分离方法有两种：分离得到纯 国)，AⅣrs购于Intemational 品后再进行活性测试，这种方法的盲目性较大；另一 no．cA．usA)，过硫酸钾(K：s208)购于F1uka 种是生物活性导向分离，但应用这种方法时，牾性测 (seeke，Gen曰8ny)。 试的样品及工作量均大大增加”3。近几年，出现了 2方法 一种色谱分析和活性测定联用的技术，在对植物成 在前期实验中采用三个体外抗氧化活性测定体 分进行分析的同时进行抗氧化活性的测定”…。中 系(DPPH自由基清除实验，AB偈自由基清除实验， 药是一种复杂的活性成分混合物，从理论上讲很适 8．胡萝h素漂白实验)归’1副对当归挥发油、姜黄挥发 合用这种联用技术进行活性成分的分析鉴定。 油、莪术挥发油进行了活性测定，证明这3个挥发油 1材料与试剂 都有不同程度的抗氧化活性。其中当归挥发油的自 由基清除作用最强。但是其活性都弱于阳性对 照VC。 在联用体系中采用AB鸭自由基，根据文献口】 进行一些改动。实验流程图见图l。该体系分为两 条路径，A路径为HPLc—DAD—Ms分析系统，包括恒 温自动进样器、色谱柱、二极管阵列检测器(DAD) 和电喷雾离子阱质谱检测仪(ESI—Ms)；B路径为 A