鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法建立.pdfVIP

上海市畜牧兽医学会2011 年学术年会论文集 鸭坦布苏病毒抗体间接 ELISA 检测 方法的建立 1, 2 1 1 1 2 1* 姬希文 ，闫丽萍 ，颜丕熙 ，李国新 ，张七斤 ，李泽君 （1.中国农业科学院上海兽医研究所 农业部寄生虫重点开放实验室，上海 200241; 2.内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特 010018 ） 摘 要：为建立快速检测鸭坦布苏病毒（DTV ）的血清学方法，本研究利用纯化的DTV 奉贤株（FX2010 ）作 为包被抗原，建立了检测 DTV 血清抗体的间接 ELISA 方法，并且对各种检测条件进行了优化。优化后确定 的抗原最适包被浓度为 1.675 μg/孔，抗原最佳包被条件为 37 ℃放置 2 h 后，4 ℃下过夜，血清的最佳 稀释度为 1:200，酶标抗体最适稀释度为 1:2,000。在优化条件下，阴阳性临界值判定标准为 0.432。用建 立的间接 ELISA 方法对禽流感病毒、新城疫病毒、网状内皮增生病病毒、I 型鸭肝炎病毒、呼肠孤病毒、 禽白血病病毒阳性血清进行了检测，均无交叉反应，表明该方法具有良好的特异性。批内和批间重复试验 的最大变异系数分别是 2.9%和 3.9%，显示该方法具有很好的稳定性。用间接ELISA 方法对 140份疑似鸭坦 布苏病血清样品进行检测，有 108份样品呈现阳性，而琼扩试验只有 32份呈阳性结果，而且用该方法检测 的阳性样品包括了琼扩试验的阳性样品，证明该方法具有较高的敏感性和特异性。本研究快速检测 DTV 抗 体间接 ELISA 的建立为该病的诊断和流行病学调查提供了新的方法。 关键词：鸭坦布苏病毒；间接 ELISA；抗体 ESTABLISHMENT OF AN INDIRECT ELISA FOR DETECTION OF ANTIBODY AGAINST DUCK TEMBUSU VIRUS JI XI-wen1, 2, 3, YAN LI-ping1, 2, YAN PI-xi1, 2, LI GUO-xin 1, 2, 3 1, 2 ZHANG QI-jin , LI ZE-jun* （1. Key Laboratory of Animal Parasitology of the Ministry of Agriculture, 2. Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241; 3. College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018 ） Abstract: An indirect ELISA was established for rapid detection of antibodies against duck Tembusu virus (DTV) using purified DTV (FX2010 isolate) as coating antigen. The reaction conditions were optimized including 1.675 资助项目:农业部动物转基因专项（2009ZX08010-022B ）；公益性行业（农业）专项经费资助（201003012 ） 作者简介: 姬希文（1984- ），女，河南新乡人，硕士研究生，主要从事禽传染病研究。 通讯作者: E-mail:lizejun@shvri.ac.cn 1 上海市畜牧兽医学会2011 年学术年