利用基因芯片技术区分禽流感病毒主要亚型.pdfVIP

维普资讯 l!f； 微生物学报ActaMicrobiologicaSinica 48(7)：935~940；4July2008 ISSN0001—6209；CN11-1995／Q http：／／journals．im．ac．cn 利用基因芯片技术区分禽流感病毒主要亚型 杨忠苹，王秀荣 ，田丽娜，王煜，陈化兰 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 ，农业部动物流感重点开放实验室，兽医生物 国家重点开放实验室，哈尔滨 150001) (重庆出入境检验检疫局，重庆 400020) 摘要：【目的】研制可同时区分 AIV的H5、H7、H9血凝素亚型及 N1、N2神经氨酸酶亚型的基因 诊断芯片。 【方法 】分别克隆了禽流感病毒的M 基因，H5、H7、H9亚型 HA 基因，N1、N2亚型 NA基因以及看家基因GAPDH的重组质粒。以重组质粒为模板 ，用 PCR方法扩增制备探针，纯化 后点于氨基修饰的片基上 ，制备基因芯片。在 PCR过程中对待检样品进行标记 ，然后与芯片杂交， 洗涤 ，扫描并进行结果分析。【结果 】结果显示检测探针可特异性的与相应的标记样品进行杂交 ，呈 现较强的杂交信号，且无交叉杂交 。同时用RT-PCR、鸡胚接种和基因芯片方法对 HI—H15亚型AIV 参考毒株、30份人工感染样品、21份现地疑似样品进行检测 ，结果发现 ，对人工感染样品芯片检测 方法与鸡胚接种和RT-PCR的符合率分别为 100％和 96％，现地样品符合率为 100％。【结论】研究表 明该方法可用于同步鉴别部分主要流行的禽流感亚型，是一种有效的新方法。 关键词 ：基因芯片；禽流感 ；亚型区分 中图分类号：Q936 文献标识码 ：A 文章编号 ：0001。6209(2008)07—0935—06 禽流感病毒 (Avianinfluenzavirus，AIV)亚型 通量快速排查 、准确鉴别亚型的集成化诊断技术。 众多，变异频繁，现已发现 16种不同的血凝素抗原 生物芯片技术是20世纪90年代初伴随着人类基 型 (HA)和9种不同的神经氨酸酶抗原型 (NA)lJJ， 因组计划的实施而产生的一门新技术 ，经过十多年的 一 般认为 H5、H7抗原型具有高致病力，并且发现 发展，已成为大规模高效获取相关信息的重要手段。 H5，H7和H9亚型逐渐对人有致病性_2]。目前家禽 它是通过微加工和微电子技术 ，将成千上万与生命相 体内以H5N1、H9N2为主要流行亚型，并且 H5亚型 关的核酸或蛋白信息集成在硅 、玻璃 、塑料等材料制 AIV已经具备感染人的能力。世界卫生组织提供的数 成的芯片载体上，以实现对基因、配体 、细胞 、蛋白 据显示，截至到 2008年 1月有 350人感染高致病性 质 、抗原以及其他生物组分准确 、快速地分析和检测。 禽流感，其中218人死亡 ，专家担心，H5N1病毒继 基因芯片在疾病诊断方面具有一定的优势，与传统检 续变异，可能具备人际间传染的能力 ，引发大规模流 测方法相比，它可以在一张芯片上同时对多种疾病进 行病，因此建立迅速 、有效的H5N1亚型及其它亚型 行检测，待测样品用量小并且能特异性检测病原微生 禽流感病毒的鉴别检测方法对于防制禽流感具有重 物的亚型及变异。 要意义。传统 的病原分离及血清学诊断方法操作繁 本研究通过制备基因芯片，进行靶基因扩增和杂 琐，无法实现对不同亚型的同步检测 ，RT-PCR方法 交 ，建立了 AIV 主要亚型鉴别诊断基因芯片检测方 也无法实现对该病毒进行快速、准确 、高通量检测分 法 ，该方