尿源产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌质粒介导氟喹诺酮类耐药性研究的论文.pdfVIP

尿源产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌质粒 介导氟喹诺酮类耐药性研究 陈科帆 吕晓菊 四川大学华西医院感染性疾病中心 四川 成都 610041 摘要：目的 研究尿源性产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株中qnrA、qnrB以及qnrS的流行情 况和耐药特征，为控制产ESBL细菌感染提供实验依据。方法 琼脂稀释法测定喹诺酮类及氨基糖苷类对 46株尿源产ESBL细菌的最低抑菌浓度。PCR法测定检测qnrA、qnrB以及qnrS的存在情况。结果 46株 产CTX-M型大肠埃希菌对环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、庆大霉素和阿米卡星的耐药率分别为26.1％、 19.6％、13.0％、60.9％和43.5％。46株大肠埃希菌中检出2株含qnrB(4.3％)，未检出qnrA和qnrS。结 论 尿源性产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌中有qnrB的存在，且对喹诺酮类以及氨基糖苷类药 物耐药性严重，不宜选择喹诺酮类药物及氨基糖苷类药物治疗产ESBL且qnr基因阳性的大肠埃希菌尿路 感染及尿源性血流感染。 关键词：质粒介导的喹诺酮类耐药；qnr;超广谱β-内酰胺酶CTX-M；大肠埃希菌 目前对qIIr基因的存在、分布以及与ESBLs的关系等方面的认识还有待进一步深入探讨。本研究通过 的现状，为防止质粒介导耐药性传播提供实验研究依据， 结果如下： 1． 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 实验菌株 复大肠埃希菌46株。 1．1．2阳性对照株以及质控菌株 研究室细菌专业组提供。 1．1．3抗生素粉剂： 自中国药品生物制品检定所。 1．1．4培养基以及试剂 LB琼脂广东环凯微生物科技有限公司；LB m疏Ⅺt；PUCMix 美国Omega公司的E．Z．N．A．Ⅲplasmid Marker：MBI公司：2xEasyTaqSuperMix buf断)北京全式金生物工程公司； (TaKaRaExTaq，10)(PCRbu雎r，25mM氯化镁，dNTP及10ading 1．1．5主要实验仪器 hls仇1lllents 细菌比浊仪法国生物梅里埃公司；多点接种仪：英国Denley Li血ted公司，A400型； 111e珊alGradiem Docl000 PcR仪Deltier PTC．200；数字化凝胶成像系统美国Bio．rad公司，Gel Cycler 型； 1．1．6PCR引物 qnrA、qrlrB以及q11rs引物参照文献设训”】，由广州华大基因生物技术有限公司合成，见表1． 表1．PCR引物 Table1．PrimersforPCR aF，sense primer；R，antisenseprimer． bNucleotide atmei11itiationcodonofthe 1 aJld 1 n岫be血gbegins qnrAl，qnrBqIlrsgenes，respectiVely． 。M=Aor orCor orT． C；H=A T；Y=C 78第十三次格床菊理文会论文汇蠕 1．2方法 1．2．1菌株收集 出产CTX．M型超广谱B．内酰胺酶(ESBLs)菌株46株。 1．2．2药敏实验 为质控菌。抗菌药物结果解释和判读均按201O版CLSI的标准执行，根据所测得的MIc值判读细菌药敏 结果为敏感(S)、中介(I)、耐药(R)。 1．2．3细菌DNA的提取(煮沸法【141) 挑取适量实验菌株于置入含500ul双蒸水的螺口管中，充分混匀，于100℃沸水中10分钟，按照说明 书吸取各菌株上清液各200u1置于EP管中，存．20℃冰箱备用。 1．2．4PCR检测qnr和测序 NucleotideDatabase 药科技有限公司