山羊精子介导转染外源的研究①DNA.pdfVIP

( ) 第 29 卷第 6 期 　　　　　　　　 　西 南 大 学 学 报 自然科学版 　　　　　　　　　　　2007 年 6 月 Vo29 　No6 J our nal of So ut hwe st U niver sit y (N at ural Science Edition) J un 　2007 ( ) 文章编号 : 2007 山羊精子介导转染外源 D NA 的研究① 赵永聚 , 　郑双艳 西南大学 动物科技学院 , 重庆 4007 16 摘要 : 目的: 建立山羊精子介导转染外源 DN A 的方法 , 并探索精液离心与否与添加异种精清对转染效率的影响. 方法 : 将采集的山羊精液经过离心处理与标记的线形化 p E GF PN 1 质粒共育转染 , 分别用免疫组化的方法检测转 染效率 、PCR 和 Sout hern blotting 检测转染外源 DN A 在精子的结合部位和结合率 ; 同时将实验分为 3 组 , 分别为 鲜精直接转染 、离心后转染和离心山羊精液添加猪精清转染 , 用免疫组化方法检测转染外源 DN A 效率. 结果 : 精 ( ) ( ) 子核后帽区是结合转染外源 DN A 的主要部位 ; 3 种处理的阳性转染率分别为 26 19 ±325 % 、6204 ±787 % ( ) ( ) ( ) ( 和 1704 ±934 % ; DNase Ⅰ消化后 的阳性转染率分别为 1150 ±505 % 、 3400 ±587 % 和 1000 ± ) ( ) 424 %. 离心组与未离心组和添加猪精清组差异极显著 p 00 1 . 结论 : 山羊精子具有 自发性结合外源 DN A 的 能力 ; 羊精清和异种精清明显降低精子结合外源基因的效率. 关 　键 　词 : 山羊 ; 精子 ; 外源 DN A ; 转染 ; 精清 中图分类号 : S827 文献标识码 : A 　　转基因动物研究的应用主要表现在促进动物生 了 80 %的阳性转基因猪 , 其中 64 % 阳性个体表达 长 、提高畜产品质量 、改善畜产品品质 ; 培育新品 [4 ] 目的基因 . 目前 , SM GT 已被多家实验室在包括 种 ; 生产各种稀有的、其它方法不易得到的有生物 牛 、羊 、猪 、兔 、鼠等哺乳动物以及鸡 、鱼 、蛙 、蜂 、 活性的药用蛋白质 ; 建立诊断和治疗人类疾病的动 蚕等多种动物上得到证实[ 57 ] . 物模型 ; 制造可用于人体移植的动物器官等[ 1] . 其 精子充当外源 DN A 的载体是一条值得深入研 中研究最深入 、应用最广泛的是转基因生物反应 究的转基因途径 , 同时外源 DN A 与精子混合培养 器 , 它潜在的社会价值是无可估量的.