反相高效液相色谱法柱后调适ph 胶束增敏荧光检测四环素类药物的研究.pdfVIP

反相高效液相色谱法柱后调节pH 胶束增敏荧光检测四环素类药物的研究* 傅承光 徐宏达 河（北大学理化分析研究中心 保定 071002） 提要 研究了适于分离检测四环素类药物的高效液相色谱荧光检测方法。为提高分析灵敏度，使用了柱后调节 pH技术。探讨了pH以及胶束浓度对荧光强度的影响。四种药物的检出限达8.0 75.6pg的水平。 关键词 反相高效液相色谱法，四环素，荧光检测，柱后pH调节，胶束 1 前言 合室中与pH为3.2的柱流出液混合，混合液的pH 在药物分析中，对四环素类药物的分析一直是 被调节为10.7，此值由荧光检测池后安装的pH测 使人注目的研究课题。应用高效液相色谱分析四环 量池 （自制，体积小于 1mL）测出，还可在线监测柱 素类药物已有报道[，?2]，其灵敏度多处于ng级水平。 后的pH变化。荧光检测的激发波长为385nm，发射 近期已有荧光检测的文献发表[3]，由于使用了高聚 波长为470nm。应用此条件获得四环素类药物的标 物多孔微球C1键合相柱，在流动相pH高达 12条 准混合物色谱图，见图1。 件下，测定了金霉素。本文使用常规的反相色谱条 件，结合柱后调节pH及胶束增敏，建立荧光检测方 法，进一步提高了灵敏度。4种四环素类药物同时测 定，检出限达到8.0 75.6pg。 2 实验部分 2.1 仪器 美国Beckman114M 型单柱塞高压输液泵，日 本ShimadzuRF-535荧光分光光度检测器，美国 Rheodyne7125型进样阀，美国AldexE-120-S-2型 柱后调节pH用输液泵，混合室 （自制），GouldBS- 271型单笔记录仪，pH测量池 （自制）。 2.2 试剂 3 结果和讨论 四环素、金霉素、脱氧四环素和脱水四环素均由 北京中国生物制品与药品检定所提供。溴代十六烷 3.1 四环素类药物的分离 基三甲胺、草酸、碳酸钾均为分析纯。甲醇为优级纯。 四环素类药物分子的可离解基团，在反相流动 石英三次重蒸馏水。 相中可以离解；控制流动相的pH小于 3.3时，只有 2.3 色谱条件 A环第四碳原子上的二甲氨基基团离解为一价正离 色谱柱：SHIMPACKC85m，150 6.mmi. 子[4]；它可与流动相中的草酸根形成离子对，满足了 d.。流动相为甲醇 水 4（3 57，V/V ，用草酸调 改善分离之目的。 节pH至3.2，流量为0.4mL/min。在柱后调节pH 3.2 四环素类药物的荧光检测 溶液中含有浓度为0.15mol/L的K2CO3，并添加了 3.2.1 介质pH条件对荧光强度的影响 浓度为70mg/L的溴代十六烷基三甲胺CTMAB， 已知四环素在碱性条件下可以实现荧光光度测 溶剂为三次蒸馏水。调节柱后溶液的流量，使其在混 定。本文使用柱后调节pH方式，将流动相的pH由 *为祝贺卢佩章先生 （院士）七十华诞而作 本文收稿日期：1995年5月16日 3.2调节至碱性的pH范围，实行荧光检测。但实验 溴代十六烷基三甲胺浓度不同对四环素类各组分荧 证明，随柱后pH调节碱液中表面活性剂CTMAB 光强度的影响，见图3。图 3表明，最佳浓度为 的添加与否获得的最佳pH各不相同。也研究了改 70mg/L。由于表面活性剂的使用，使四环素类药物 变CTMAB浓度在20～50mg/L范围内对确定的 的荧光发射增强。这是因为在测定四环素分子荧光 pH影响反而不大；但随CTMAB浓度增大，有利于 的介质中，添加了适量表面活性剂，改变