银杏叶提取物中黄酮类成分的高效液相色谱探究.pdfVIP

银杏叶提取物中黄酮类成分的 高效液相色谱分析 谢大年 郭兆贵 湖（南医科大学 临床药理国家培训中心 长沙 410078） 流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液 5（5：45，流速： 1 前言 1.0mL/min；柱温：25℃妫，进样体积：10L，检测波长： 银杏叶提取物E（xtractGinkgobiloba,EGb）作 360nm。 为治疗应用已有几个世纪，在德国和法国已成为医 2.4 样品制备 生最常开的处方药品之一 我国早在70年代虽有 取0.1gEGb，加20mL甲醇使其完全溶解，然后 EGb制剂面市，但缺乏适当的质量控制方法，产品 加入1.5mol/L的盐酸溶液20mL混匀，置水浴上 质量不稳定，影响了该产品在临床上的应用。EGb 回流加热120分钟，冷却，用甲醇定量转入50mL的 中含有黄酮甙、银杏内酯和一些酚性酸。国内多采用 容量瓶并稀释至刻度，用FA0.5m滤膜过滤。 比色法[]测定EGb所含银杏总黄酮作为含量标准， 3 结果与讨论 该法重现性较差。国外采用样品直接进样，梯度洗脱 高效液相色谱分析，测定其所含黄酮甙类成分[2,; 3.1流动性的选择及P 值对色谱分离的影响 或样品经酸水解后，梯度洗脱高效液相色谱分析，测 EGb经酸水解后，含有三种主要黄酮甙元，以 定水解甙元含量[4,5]也有用高效液相色谱法测定 甲醇-水5（5：45为流动相，三种成分可获得满意分 EGb中银杏内酯含量的报道[6]。由于梯度洗脱常引 离。由于黄酮甙元的酚羟基易于电离，组分峰拖尾， 起基线漂移，给定量分析带来困难。我们研究了 加入磷酸调整流动相pH为2.5，组分峰的对称性良 EGb经酸水解，等度洗脱高效液相色谱分析，水解 好，色谱图见图1。乙腈或四氢呋喃有机改性剂不能 后的三种主要黄酮甙元槲皮素、山萘素和异鼠李素 改善山萘素和异鼠李素的分离效果。 获得满意的分离。方法简便，重现性好，准确度高。 2 实验部分 2.1 试剂与样品 重蒸水 （自制，MilliporeHA0.45m滤膜过 滤），甲醇(AR,MilliporeFA0.5m)，磷酸G（R，槲 皮素对照品 （中国药品生物制品检定所提供，081- 9003溶解于甲醇中，配制成0.06mg/mL，用前新鲜 配制。EGb湖南麓山天然植物制药有限公司提供）。 2.2 仪器 美国光谱物理公司高效液相色谱仪SP8800泵， 3.2色谱峰归属及峰纯度检查 S4400型积分仪，ChromDe脱气机，Sheri-5RP-18 以槲皮素对照品确定槲皮素峰位，柱后收集另 5（m）色谱柱 2（20mm×4.6mm，进样器配10L定 两种洗脱组分，氮气挥散溶剂，分别以甲醇和氢氧化 量管。WatersM490可编程序紫外检测器。 钠的甲醇溶液溶解，测定紫外吸收光谱，与文献[7]图 2.3色谱条件 谱比较确定山萘素和异鼠李素的峰位。以吸收度比 本文收稿日期：1993年10月10日，修回日期：1993年12月21日 值法 3（60nm/254nm检测，证明槲皮素、山萘素和异 品银杏总黄酮含量分别为22.2%,25.4%,21.4% 鼠李素峰均为纯组分。 和25.4%。EGb含有20多种黄酮类成分，测定每一 3.3样品稳定性 种黄酮成分的含量十分复杂。但这些成分的甙元部 槲皮素对照品和水解后的样品溶液放置过夜， 分为槲皮素、山萘素和异鼠李素，经酸水解后高效液 含量降低较大，所以样品和对照品应新鲜制备。