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临床检验仪器复习题及答案

问题1：电阻抗法血液分析仪检测细胞体积的基本原理是什么？检测过程中如何区分白细胞、红细胞和血小板？

答案1：电阻抗法（库尔特原理）的核心是“脉冲计数”。当细胞通过充满电解质溶液的微孔管时，会占据部分体积，导致微孔两侧电极间的电阻发生变化，产生与细胞体积成正比的电压脉冲。脉冲的数量反映细胞数量，脉冲的幅度反映细胞体积大小。

区分三种细胞的关键在于阈值设置和体积分布：①红细胞体积较大（80-100fl），检测时需先用溶血剂破坏红细胞膜释放血红蛋白（但保留细胞膜残余），此时红细胞体积缩小为35-90fl；②血小板体积最小（2-20fl），位于体积直方图最左侧；③白细胞体积最大（35-450fl），通过溶血剂处理后，中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞因胞质和核结构不同，体积差异可进一步分类（如三分群仪器通过35-90fl为淋巴细胞群，90-160fl为中间细胞群，160-450fl为中性粒细胞群）。

问题2：全自动生化分析仪常用的分析方法有哪几类？连续监测法（速率法）与终点法的主要区别是什么？

答案2：常用分析方法包括：①终点法（平衡法）：反应达到平衡时检测吸光度变化，如总蛋白、总胆红素测定；②连续监测法（速率法）：在反应线性期连续监测吸光度变化速率，如ALT、AST等酶活性测定；③两点法（固定时间法）：检测反应起始和结束两个时间点的吸光度差值，减少干扰；④比浊法：通过检测溶液浊度变化（如免疫透射比浊、散射比浊）测定特定蛋白。

连续监测法与终点法的区别：①时间点：速率法监测反应动态过程（通常2-5分钟内多个时间点），终点法仅测反应平衡时的单点；②适用项目：速率法适用于酶促反应（需线性期），终点法适用于非酶反应或反应能完全进行的项目；③抗干扰能力：速率法通过监测线性期可排除样品空白、试剂空白的干扰（如内源性物质对反应的延迟影响），终点法则易受反应不完全或非特异性反应干扰。

问题3：化学发光免疫分析仪与酶联免疫吸附试验（ELISA）相比，主要优势体现在哪些方面？

答案3：化学发光免疫分析（CLIA）相比ELISA的优势包括：①灵敏度更高：化学发光反应的量子产率（光信号强度）远高于酶促显色（如HRP催化DAB显色），检测下限可达pg/mL甚至fg/mL级别（ELISA通常为ng/mL）；②检测速度更快：CLIA多采用磁微粒分离技术（如链霉亲和素-生物素系统），结合自动化加样和温育，全程时间可缩短至20-60分钟（ELISA需2-4小时）；③线性范围更宽：发光信号与待测物浓度在较宽范围内呈线性关系（如10^3-10^5），减少稀释步骤；④重复性更好：自动化仪器减少人工操作误差（如洗板、加样），CV值通常＜5%（ELISA手工操作CV可达10%-15%）；⑤无放射性污染：避免了RIA（放射免疫）的同位素危害；⑥多项目联检能力：部分仪器支持同时检测多种指标（如肿瘤标志物、激素组合），提高效率。

问题4：全自动微生物鉴定及药敏分析系统（如VITEK2）的工作原理是什么？如何实现细菌鉴定和药敏试验？

答案4：VITEK2系统基于光电比色和荧光检测原理：①鉴定卡：每张卡含64个反应孔（革兰阳性/阴性菌、酵母等专用卡），孔内包被不同碳源、氮源、酶底物（如β-半乳糖苷酶底物）。细菌代谢产物（酸/碱、酶活性）会改变孔内pH（通过指示剂显色）或产生荧光物质（如4-MU标记底物被酶解后释放荧光），仪器通过850nm红外光（测浊度，反映菌量）和530nm绿光（测显色）、450nm蓝光（测荧光）检测反应孔的光学变化。②药敏卡：含不同浓度抗生素（覆盖临床常用品种），通过检测细菌在抗生素存在下的生长抑制情况（浊度变化），计算最小抑菌浓度（MIC），并根据CLSI标准自动判读敏感（S）、中介（I）、耐药（R）。

系统通过数据库比对（含2000+菌种的代谢模式）完成鉴定，药敏试验则通过生长曲线分析确定MIC值。

问题5：实时荧光定量PCR仪（qPCR仪）的核心技术是什么？Ct值（循环阈值）的定义及临床意义是什么？

答案5：qPCR仪的核心技术是荧光检测与温度控制：①荧光检测：通过激发光（如470nm）照射反应体系，捕获荧光基团（如SYBRGreen嵌入双链DNA，或TaqMan探针5’端报告基团被切割后释放荧光）的发射光（如520nm），实时监测PCR扩增过程的荧光信号；②温度控制：采用半导体加热/制冷模块（Peltier元件），实现快速变温（升降温速率＞5℃/秒），确保变性（95℃）、退火（55-65℃）、延伸（72℃）三阶段的精确控温（误差＜0.1℃）。

Ct值定义为荧光信号达到设定阈值（基线荧光标准差的10倍）时所经历的循环数。临床意义：①定量依据：Ct值与初始模板浓度的对数呈线性关系（C