生物医学电镜技术与细胞及组织超微结构总论.pptVIP

（一）、超薄切片及其染色技术超薄切片（ultrathin-section）制备过程示意图：**第30页，共68页，星期日，2025年，2月5日1、取材的基本原则：快：1min小：1mm3利：静：冷：4℃取材部位要准确；成批取材，部位一致、；标本的编号和标签。**第31页，共68页，星期日，2025年，2月5日2、固定：①、几种常用的固定剂的理化特性和使用原则：a、四氧化锇（Osmiumtetroxide，OsO4）；又称锇酸，是电镜生物样品使用最广泛的固定剂，兼有电子染色作用，可作单固定，一般不用于电镜细胞化学实验的固定。对糖原和核酸的保护作用差。多用于后固定。b、戊二醛（glutaraldehyde，C5H8O2）；不能单独作为电镜样品固定液，对脂肪的保护作用差。没有“电子染色”的作用，通常用于前固定。c、甲醛（formaldehyde）。电镜多用多聚甲醛，对酶活性保存好，可与戊二醛混合或单独用于细胞化学灌流固定或作为前固定液。②、固定方法：a、双重固定法；b、体内原位固定法；c、灌流固定法。**第32页，共68页，星期日，2025年，2月5日3、脱水：应递增浓度进行4、浸透：半浸透纯浸透5、包埋、聚合：环氧树脂（epoxyresin）618#，Epon8126、切片：修块光切（半薄切片，0.5-1um）定位超切(超薄切片,50-70nm)超薄切片机(ultramicrotome)，玻璃刀，钻石刀，复有支持膜的载网（grid）（铜、镍、金网）。**第33页，共68页，星期日，2025年，2月5日7、电子染色：利用重金属离子对不同细胞结构的结合能力不同，使各细胞结构对电子产生不同散射程度，以增强明暗之比（反差）。①常用的电子染色剂有以下几种a、醋酸铀（Uranylacetate），即醋酸双氧铀，多用于块染；b、枸橼酸铅（Leadcitrate），用于片染，易被空气中的CO2污染。②电子密度（electrondensity）的概念：**第34页，共68页，星期日，2025年，2月5日（二）、负染技术利用高密度无结构的重金属物质把生物标本包绕起来。这种反差是负像（与正染色的超薄切片相比较）。最常用的染色剂是磷钨酸钠（phosphotungsticacid，PTA），此法常用于病毒、蛋白分子或细胞亚单位的分子结构研究，制样简单，可作快速诊断。**第35页，共68页，星期日，2025年，2月5日（三）、电镜细胞化学技术

（electronmicroscopiccytochemistry）在保持细胞超微结构完整的条件下，借助细胞中的化学反应，研究细胞乃至细胞器的结构与功能的关系，是与化学、生物化学及免疫学有密切联系的一门学科。广义的电镜细胞化学研究方法主要有细胞超微标记示踪技术、电镜酶细胞化学技术和电镜免疫细胞化学技术（简称免疫电镜技术）等几种。**第36页，共68页，星期日，2025年，2月5日1、电镜酶细胞化学术(electronmicroscopiccytochemistryofenzymeorultracytochemistryofenzyme)基本原理及内容:酶细胞化学术（enzymecytochemistry）是利用酶催化反应特点，从亚微结构上研究酶的分布和活性。按其催化反应的性质可分为水解酶、氧化还原酶、转移酶、裂解酶、合成酶和异构酶六大类，应用较多的有水解酶和氧化还原酶。现以水解酶为例，介绍此技术的主要过程和基本原理。初级反应：底物被磷酸水解酶作用后分解产生磷酸。底物磷酸水解酶H3PO4最终反应：磷酸与金属捕捉剂结合形成反应产物。H3PO4捕捉剂（如Pb2+）Pb3(PO4)2↓反应产物为电子致密的沉淀物，电镜下易于观察并显示出酶的定位。近年来常用铈（Ce