情境 1 淀粉酶的发酵生产-任务 1 淀粉酶产生菌的分离及酶活性测定-1752701313713.pptxVIP

情境1淀粉酶的发酵生产任务1：淀粉酶产生菌的分离及酶活性测定

任务1.1淀粉酶产生菌的分离

工作原理土壤是微生物的大本营，成千上万的微生物在里面生长，要想分离出能产生某一特定酶的微生物，必须建立相应“筛子”。淀粉遇碘变蓝，淀粉酶能使淀粉分解，遇碘后不再变蓝。在含淀粉的培养基上对样品分离培养后，滴加碘液，如果菌落周围出现不变蓝的透明圈，初步说明该菌产淀粉酶，根据透明圈的大小可初步判断菌种产淀粉酶的能力。

从平板上分离筛选淀粉酶产生菌，我们采用的是（）方法？变色圈透明圈抑菌圈生长圈ABCD提交单选题

任务实施一、实施准备：1、富集培养基（100mL）：可溶性淀粉2g，酵母膏0.5g，121℃灭菌15min。2、分离培养基（100mL）：可溶性淀粉0.5g，蛋白胨0.5g，酵母膏0.5g，KH2PO40.05g，MgSO4?7H2O0.01g，CaCl2?2H2O0.05g，琼脂2.0g，pH6.0，121℃灭菌15min。

每组准备下列材料:富集培养基45mL分离培养基150mL无菌水4.5mL/管共5管,无菌涂布棒3支1mL无菌枪头若干

二、实施步骤采样富集培养稀释涂布分离37℃培养48h产酶微生物鉴定面粉厂、糕点厂、厨房周围或农田等可能含淀粉的环境采集土样称取土样5g，放入45mL富集培养基中，37℃、200r/min摇瓶培养24h向平板内加入碘液数滴后进行观察纯化挑取其中透明圈较大的的单菌落，划线于平板，37℃倒置培养2～3d

无菌操作你做到了吗？严格做到还不够规范，有待加强忘记进行无菌操作ABC提交投票最多可选1项

任务1.2淀粉酶产生菌的发酵

1、配制发酵培养基发酵培养基（100mL）：可溶性淀粉2.0g，蛋白胨0.5g，酵母膏0.5g，KH2PO40.05g，MgSO4?7H2O0.01g，(NH4)2SO40.1g，CaCl2?2H2O0.05g，pH6.0，121℃灭菌15min。

2、淀粉酶产生菌的摇瓶发酵将纯培养的菌落接种于发酵培养基中，37℃、200r/min摇瓶发酵72h。

任务1.1.3淀粉酶的活性测定

工作原理淀粉遇碘呈蓝色，这种淀粉-碘复合物在660nm处有较大的吸收峰，可用分光光度计测定。随着酶的分解作用，淀粉长链被切断，生成小分子的糊精，使其对碘的蓝色反应逐渐消失。可以根据一定时间内蓝色消失的程度为指标来测定α-淀粉酶的活力。

*酶活性：用酶促反应速度来表示，即在适宜条件下，单位时间内底物的消耗量或产物的生成量。酶活性测定和酶活性单位*酶活性单位：在规定条件下，酶促反应在单位时间内生成一定量的产物或消耗一定数量的底物所需的酶量。

国际单位(IU)在特定的条件下，每分钟催化1μmol底物转化为产物所需的酶量为一个国际单位。催量单位(katal)１催量(kat)是指在特定条件下，每秒钟使１mol底物转化为产物所需的酶量。kat与IU的换算：1IU=16.67×10-9kat催量国际单位

本次任务中，淀粉酶活性采用的是自定义单位，规定为：一个α-淀粉酶单位相当于在规定条件下，将浓度为1%的可溶性淀粉溶液的显蓝强度降低1%时所需的酶量。

一、实施准备（1）底物溶液：称取1.0克可溶性淀粉，用40mL蒸馏水调匀，徐徐倒入适量煮沸的蒸馏水中，加热煮沸至透明为止。随后冷却，用浓醋酸将pH值调至6.0，并用蒸馏水定容至100mL。（注：需当天配置）（2）碘溶液：取0.5克碘和5.0克碘化钾溶于水中，用蒸馏水定容至50mL，测定前须用蒸馏水按1:100稀释。（注：此溶液须存于棕色瓶内）（3）0.1M盐酸（HCl）（4）酶溶液（发酵溶液3000rpm，8min离心所得上清液）任务实施

二、实施步骤1、取两支试管，标记为测定管和空白管，分别准确移入10mL底物溶液，置于60℃水浴中加热10min；2、10min后，于测定管中加入1mL酶溶液，空白管中加入1mL蒸馏水，迅速摇匀，精确保温10min；3、10min后迅速从该反应混合液中分别取出1mL，加入事先准备好的装有10mL0.1M盐酸的试管中，摇匀；（目的是终止反应）4、用移液管分别从上一步盐酸的试管中吸取1mL移入盛有10mL稀释过的碘溶液试管内，摇匀，并立即用分光光度计于660nm处以蒸馏水为参比测定吸光度（1cm比色皿）。

酶活测定注意事项：1、底物溶液及酶液应事先预热至反应温度；2、反应时间