情境1淀粉酶的发酵生产任务2淀粉酶产生菌的改良45课件.pptVIP

LOGO情境1淀粉酶的发酵生产任务2：淀粉酶产生菌的改良任务描述微生物体内存在着严密的调控系统，一般不会过量合成某种物质。因此从自然界分离的野生型的菌株合成目标产物的能力通常不高，需要通过基因突变，改变微生物原有的调控。用物理诱变剂（如紫外线、X光等）和化学诱变剂（如亚硝基胍等）处理微生物，可以使微生物的基因发生突变或发生染色体畸变，从而使微生物的遗传特性发生改变，通过平板分离、摇瓶等筛选方法可以筛选出高产、性能优良的菌株。本次任务中，我们将采用紫外线诱变的方法对任务1中得到的菌株进行诱变，并通过平板稀释涂布分离得到单菌落，滴加碘液，根据透明圈观察诱变效果，并与同一稀释度的未诱变菌进行比较，同时比较不同诱变时间的效果。任务目标知识目标：了解常用的物理诱变剂和化学诱变剂；掌握诱变育种的一般方法步骤。能力目标：1.掌握物理诱变剂及化学诱变剂的安全使用；2.学会诱变育种的操作方法。素质目标：安全意识;细心严谨的工作态度。任务实施一、实施准备1、菌株：任务1中筛选到的淀粉酶高产菌2、培养基（100mL）：可溶性淀粉2.0g，蛋白胨0.5g，酵母膏0.5g，KH2PO40.05g，MgSO4?7H2O0.01g，(NH4)2SO40.1g，CaCl2?2H2O0.05g，琼脂2g，pH6.0。3、试剂：无菌生理盐水、碘液4、仪器：天平、平皿、高压灭菌锅、净化工作台、培养箱、无菌大试管、振荡混合器、离心机、紫外线灯箱、无菌大头针、磁力搅拌器、大试管（内装9mL无菌水）、无菌1mL和10mL玻璃吸管、无菌玻璃涂棒、黑布、培养箱、电冰箱。二、实施步骤1.菌液的制备：把枯草杆菌菌种接入有100ml培养基的250ml无菌三角瓶中，37℃振荡培养14-18h。2.稀释：取摇瓶培养至对数期的菌液（菌液浓度为108-1010）0.5ml入4.5ml生理盐水中，进行10倍稀释，稀释度为10–1-10–7。3.涂布：取10–5-10–7的菌液各100ul涂平板，每个稀释度涂平板6只。4.紫外线处理：（1）在暗室或红光下进行紫外线处理。预先打开紫外灯预热20min,使光波稳定。（2）紫外线处理：把10–5、10–6、10–7三个浓度的平板分成三组，每组每个浓度各2块平板，分别紫外线照射0S、60S和180S，（计时从开盖起，加盖止）。处理后的平皿用黑纸包好，置37℃培养，48h后观察并记录结果。紫外灯功率为30W，照射距离为30cm

（3）观察诱变效应：取出平皿，分别向菌落分散开的平板内加碘液数滴，在菌落周围将出现透明圈，分别测量透明圈与菌落直径并计算其比值（HC值）。与对照平板进行比较，把明显大于对照的菌落接到斜面培养保存。（4）计算存活率及致死率：存活率=处理后每毫升活菌数/对照每毫升活菌数×100%致死率（%）=1-存活率稀释倍数处理时间/min10-510-610-7菌落数HC值致死率菌落数HC值致死率菌落数HC值致死率0（对照）?/?/?/1???3???诱变效果分析??5、结果记录及分析6、紫外线诱变注意事项：紫外线诱变，一般采用15W或30W紫外线灯，照射距离为20-30cm；照射时间依菌种而异，一般为1-3min；死亡率控制在50％-80％为宜；被照射处理的细胞，必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态，以利于均匀接触诱变剂，并可减少不纯种的出现；细菌细胞的生理状态要求培养至对数期为最好。任务思考1、紫外线诱变作用的机理是什么？2、用于诱变的菌悬液（或孢子悬液）为什么要充分振荡？3、经紫外线处理后的操作和培养为什么要在暗处或红光下进行？*LOGO*