实验一光学显微镜构造及使用.pptVIP

本学期细胞生物学实验开设项目和时间安排序号项目名称学时性质01显微技术总论（光学显微镜构造及使用）6综合性02叶绿体的提取分离和荧光观察3综合性03细胞器的超活染色技术3验证性04哺乳类红细胞综合实验（细胞凝集和低渗溶血）3验证性05巨噬细胞吞噬现象观察3验证性06植物染色体标本制作和组型分析6综合性07动物染色体标本制作技术3综合性08动物细胞微丝束的光学显微观察6综合性09染色体核仁组织区的银染色法3验证性10鸡红细胞融合实验3验证性11生物制片技术6综合性本文档共41页；当前第1页；编辑于星期日\13点1分光学显微镜构造和使用一、实验目的1．了解和掌握普通光镜、暗视场显微镜、相差、荧光、微分干涉差、倒置等显微镜的原理和使用方法。同时简单介绍电镜原理。2．了解掌握光学显微镜的光路合轴方法，了解显微摄影的基本操作。本文档共41页；当前第2页；编辑于星期日\13点1分二、原理和方法一）普通（明场）光学显微镜1．普通明场光学显微镜各零部件构成：镜座、柱、筒、臂、转换器、载物台、调节器、光源及光源聚光镜，视场光阑、孔径光阑、镜台下聚光器、聚光器前透镜、物镜和目镜。2．物镜的种类：消色差物镜、复消色差物镜、平场物镜。3．显微镜的光路原理（略）光源色光→视场光阑—折射→孔径光阑→聚光镜→样品在物镜后焦平面成像→目镜观察本文档共41页；当前第3页；编辑于星期日\13点1分4．显微性能参数显微镜的性能参数包括分辨率、放大率，焦点深度、视场宽度等。1）分辨率：R=0.61λ/N.A.；N.A.＝ｎsinα/2式中：n=介质折射率；α=孔径角（镜口角，物镜最边缘斜光线与显微镜光轴所成的交角），N.A.=数值孔径（镜口率，numericaperture）。镜口角总是要小于180?，所以sina/2的最大值必然小于1。2）显微镜总放大率（Mt）=物镜放大率×目镜放大率×摄影透镜放大率；有效放大率=物镜数值孔径的500-1000倍，故需根据物镜选配适宜的目镜。本文档共41页；当前第4页；编辑于星期日\13点1分5．显微镜的使用1）光路合轴：镜检与摄影前，使照明光线与显微镜光轴合一即为光路合轴，整个过程涉及到聚光器调中和光源灯丝调中两部分，详细过程参阅教材。2）光阑的调节：视场光阑用于控制照明光束可以限定视场大小；孔径光阑用于限定聚光器孔径大小。调节时以视场光阑内缘外切孔径光阑为基准。3）各种特殊光学构件的安装、调试和使用（以BX-50系统显微镜为例）本文档共41页；当前第5页；编辑于星期日\13点1分OLYMPUSBX50

系统显微镜组成部分本文档共41页；当前第6页；编辑于星期日\13点1分OLYMPUSBX50本文档共41页；当前第7页；编辑于星期日\13点1分本文档共41页；当前第8页；编辑于星期日\13点1分光强预置旋钮粗细准焦旋钮本文档共41页；当前第9页；编辑于星期日\13点1分激发模块本文档共41页；当前第10页；编辑于星期日\13点1分万能聚光镜孔径光栏拉杆本文档共41页；当前第11页；编辑于星期日\13点1分万能聚光镜视场光阑调节环本文档共41页；当前第12页；编辑于星期日\13点1分光路合轴调中①转动聚光镜高度升降旋钮把聚光镜升高到最高位置；②放入样品，将DIC、起偏器等光学附件移出光路，聚光镜转到明场上；③用4X或10X物镜聚焦，调至清晰；④视场光阑打至最小；⑤通过调节聚光镜升降旋钮下降聚光镜，使视场中出现清晰正多边形图像；⑥通过调节聚光镜中心调节旋钮，把正多边形图像移至视场中心位置；⑦逐步打开视场光阑，如正多边形与视场边缘内切，则聚光镜已正确对中；⑧实际观察中，稍加大视场光阑，使它的图象刚好与视场外切即可。⑤⑥⑦⑧本文档共41页；当前第13页；编辑于星期日\13点1分光路合轴调中过程本文档共41页；当前第14页；编辑于星期日\13点1分调节装置本文档共41页；当前第15页；编辑于星期日\13点1分二）暗视野显微镜特殊部件：暗视野聚光器/暗视野光挡1．由于聚光器构造的特殊性，导致直射光线不能进入视野，此时视野黑暗。光线斜向照射时，样品产生散射光，一部分散射光线可以进入视野，在黑暗视野中样品边缘明亮。2．暗视野光档：光挡直径取决于物镜数值孔径，光挡恰好能挡住物镜通光孔径。另一个问题是暗视场聚光器的调中。本文档共41页；当前第16页；编辑于星期日\13点1分暗视野光挡本文档共41