卡托普利抗高糖诱导的H9c2细胞氧化损伤作用及其作用机制的分析-药学;药理学专业毕业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的： 研究卡托普利(Captopril，Cap)对高糖诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用， 探讨该作用与P13K／Akt和ERKl／2信号转导通路的关系。 方法： 1．高糖诱导H9c2细胞氧化损伤模型的建立 用含10％FBS的DMEM培养基培养H9c2细胞24 h后，换用含不同浓度葡萄糖 无FBS的DMEM培养基处理细胞48 h，采用MTT法检测细胞存活率。选择适宜的 葡萄糖浓度，建立高糖诱导H9c2细胞氧化损伤的模型。 2．Cap抗高糖诱导I拘H9c2细胞氧化损伤作用及其与P13K／Akt信号通路的关 系 用含10％FBS的DMEM培养基培养H9c2细胞24 h，按以下分组加入不同试药 孵育48 h。实验分7组：①C组(正常对照组)：加入无FBS的DMEM培养基；②G 组(模型组)：加入浓度为350 mmol／L的葡萄糖；(亘)Capl0+G组：同时加入终浓 度为10,mol／L的Cap和350 mmol／L的葡萄糖；@Capl00+G组：同时加入终浓度 为100 pmol／L的Cap和350 mmol／L的葡萄糖。⑤Ly+G组：终浓度为10 I-tmol／L的 LY294002(P13K／A虹印制剂)预处理10 min，再加入终浓度为350 mmol／L的葡萄 糖；(查)LY+Capl0+G组：终浓度为10 v．moFL的LY294002预处理10 min，再同时 加入终浓度为10 I_tmol／L的Cap和350 mmol／L的葡萄糖；(!)LY+Capl00+G组：终 浓度为10 I-tmol／L的LY294002预处理_10rain，再同时加入终浓度为100 l-lmol／L的 Cap和350 mmoFL的葡萄糖。MTT法测定细胞存活率，比色法测定细胞培养液中 乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase，LDH)活性、总超氧化物歧化酶(Total Super Oxide Dismutase，T-SOD)和锰超氧化物歧化酶(Manganese Super Oxide Dismutase， Mn．SOD)活力以及丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量；Hocchst 33258染色、 caspase．3活性检测细胞凋亡；Western blot法检测H9C2细胞中p．Akt和t。Akt的蛋白 表达水平。 3．Cap抗高糖诱导的H9c2细胞损伤的作用及其与ERKl／2信号通路的关系 用含10％FBS的DMEM培养基培养H9c2细胞24 h，按以下分组分别加入不同 试药孵育48 h。实验分7组：①至④同上；⑤PD+G组：终浓度为50 pmol／L的 PD98059(EIⅨl／2抑制剂)预处理30 min，再加入终浓度为350 mmol／L的葡萄糖； 天津医科大学硕士学位论文⑥PD+C印10+G组：终浓度为50 天津医科大学硕士学位论文 ⑥PD+C印10+G组：终浓度为50 lxmoFL的PD98059预处理30 rain，再加入终浓度 为10 I_tmol／L的Cap和350 mmol／L的葡萄糖；(⑦PD+Capl00+G组：终浓度为50 I_tmol／L的PD98059预处理30 min，再加入终浓度为100 I．tmol／L的Cap和350 mmol／L 的葡萄糖。MTT法测定细胞存活率、比色法测定细胞培养液中LDH活性、T-SOD 和Mn．SOD活力以及MDA含量；Hoechst 33258染色、easpase．3活性检测细胞凋亡。 Western blot法检．澳tJH9c2细胞中p．ERKl／2和EIⅨ1／2的蛋白表达水平。 结果： 1．高糖诱导H9c2细胞损伤模型的建立 在葡萄糖浓度为350 mmol／L处理48 h的条件下，细胞出现皱缩、破裂，与C (1000／硅o)组比较，细胞存活率(52．960／甜：3．62％)显著降低，且降低程度适中，实验 结果重复性好，确定后续实验采用浓度为350 mmol／L葡萄糖建立模型。 2．Cap抗高糖诱导的H9c2细胞氧化损伤作用及其与P13K／Akt信号通路的关 系 Capl0+G和Capl00+G组分别与G组相比，细胞存活率显著提高 (82．810／硅2．03％，82．65％士2．55％VS．54．68％士2．28％，P0．01)、细胞培养液中LDH 活性显著降低(250．9+8．8，237．0士15．0 VS．631．7士19．5，PO．01)；T．SOD活力 (17．99+1．89，16．44士2．11 VS．10．92-+1．45，PO．01)及Mn．SOD活力显著提高 (8．431士1．16，8．153士1．09 vS．5．232士0