血液病毒核酸检测与酶联免疫检测比较分析-comparative analysis of blood virus nucleic acid test and enzyme linked immunosorbent assay.docxVIP

独 创 性 说 明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含 为获得河北联合大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了 明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解河北联合大学有关保留 、使用学位论文的规 定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权 保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将 学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公 开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授学位之日起□ 自年月日起作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的：通过对献血者血样进行酶联免疫检测与核酸 PCR 荧光检测，比较两种检测 方法的优缺点，分析血样误检的原因。方法：对唐山市中心血站 30315 例献血者血样进行 HBsAg、HCVAb 和 HIVAg-Ab 二次酶联免疫筛查，酶免阴性和阳性的血样分别在 HAMILTON STAR 加样仪上实 现血液样本汇集，用 EZbead System-32 核酸提取仪提取样本核酸，以 ABI7500 荧 光定量 PCR 仪做 HBV、HCV 和 HIV 病毒核酸扩增检测，计算酶免检测漏检率， 对漏检血样做 HBV 两对半免疫检测和罗氏病毒含量定量测定，并追踪漏检血样患者。对 HBV、HCV、HIV 酶免检测和核酸检测的阳性检出率做统计学分析，同时 对酶联免疫法实验的相对灵敏度和特异度进行初步确认。结果：在 30315 份献血者血样中，对 29852 份献血者二次酶联免疫法筛查及转氨酶 和螺旋体检测合格的血样进行核酸检测，发现 15 份 HBV DNA 阳性血样，漏检率 是 0.50‰。对漏检血样进行两对半检测和罗氏定量检测，结果为：HBsAg 均为阴 性，7 份 HBsAb 阳性，1 份 HBeAg 阳性，7 份 HBeAb 为阳性，11 份 HBcAb 为阳性，其中 1 份血样 HBV 罗氏定量为 2520IU/mL，Ct 值与罗氏定量检测对数值相关 系数 r = -0.82761。一年后追踪检测 9 份患者血样，6 份酶免检测阳性。HBV 酶免 检测和核酸检测的阳性检出率是 2.78‰和 2.21‰，HIV 酶免检测和核酸检测的阳 性检出率是 1.37‰和 0.05‰，均存在统计学差异。二次酶联免疫技术的血液筛查初 步确认灵敏度是 90.07％，特异度是 99.95％。结论：1.以病毒 PCR 磁珠检测与罗氏定量核酸检测确证实验为参照，现行的二次酶联免疫技术的血液筛查存在部分 HBV 漏检；2.二次酶联免疫技术的血液筛查初 步确认相对灵敏度较低，相对特异度较高，有待进一步提高试剂灵敏度，同时减少 假阳性结果的出现；3.酶联免疫检测与核酸检测各有优缺点，可以在临床的输血安 全检测中互补应用。图 11 幅；表 11 个；参 52 篇。 关键词：酶联免疫技术；病毒核酸扩增技术；HBV、HCV、HIV 定量检测；HBV 感染；分类号：R372；- I -河北联合大学硕士学位论文AbstractObjective：To compare the advantages and disadvantages of ELISA and PCR bead detection, thereby to learn how many blood samples could be missed by ELISA tests. Methods：First, the two-time ELISA test was given to 30315 donors’ blood samples and NAT test was performed on samples negative and positive for HBsAg, HCVAb and HIVAg-Ab by ELISA. Second, the donors’ samples were pooled by HAMILTON STAR sampling processor and extracted nucleic acid by EZbead System-32. HBV DNA, HCV RNA and HIV RNA were amplified and detected by ABI quantitative Fluorescence PCR instrument. The third step was to make statist