软脂酸对肠道glp-1分泌细胞活性及脂质代谢酶的影响-effects of palmitic acid on the activity of glp - 1 secreting cells and lipid metabolizing enzymes in intestinal tract.docxVIP

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2018-05-30 发布于上海
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软脂酸对肠道glp-1分泌细胞活性及脂质代谢酶的影响-effects of palmitic acid on the activity of glp - 1 secreting cells and lipid metabolizing enzymes in intestinal tract

目录中文摘要..................................................................................1英文摘要..................................................................................3英文缩略词............................................................................6正文前言..........................................................................................7材料与方法............................................................................13结果........................................................................................22讨论........................................................................................26综述........................................................................................37致谢........................................................................................47中文摘要目的：2型糖尿病发病率在我国有明显升高的趋势，有学者提出可能与追赶生长方式密切相关。肥胖及T2DM患者可出现血游离脂肪酸的升高并伴有营养物质刺激下的GLP-1的分泌受损。追赶生长人群及动物表现出明显的脂质不成比例的增长，血游离脂肪酸升高及肠促胰岛素效应的受损。血游离脂肪酸的升高可以造成多种细胞功能和活性的损伤，在糖代谢异常方面发挥着重要的作用。在研究体外游离脂肪酸对细胞损伤的相关机制方面，较常用的物质为软脂酸，本实验旨在观察软脂酸对人源性GLP-1分泌细胞活性的影响，并探讨其对L细胞脂质代谢通路酶的影响。方法：将人源性GLP-1分泌细胞（NCI-H716）在含有10%胎牛血清、1%青/链霉素的RPMI1640培养基中培养，实验前一天将细胞接种到铺有基质胶的培养板中诱导分化，24小时后分组及处理如下：1不同浓度、不同时间软脂酸干预对NCI-H716细胞活性的影响：不含软脂酸的对照组（NC组）和软脂酸干预组：PL组（0.125mM）、PM组（0.25mM）、PH组（0.5mM），在干预后的4小时、24小时和48小时CCK法检测细胞活性。2不同浓度软脂酸干预NCI-H716细胞48小时，RT-PCR检测软脂酸对L细胞脂质代谢通路酶：脂肪酸合成酶（FAS）、二酰甘油酰基转移酶-1（DGAT1）、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1（CPT-1）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的mRNA表达的影响。结果：1软脂酸干预4h时，PM组、PH组与NC组相比细胞活性分别下降了13%（P＜0.05）、53%（P＜0.01），PL组与NC组相比差异无统计学意义；而软脂酸干预24h及48h，三个干预组细胞活性分别下降了52%和68%、72%和76%、77%和79%（与对照组相比较P值均＜0.01）。2RT-PCR结果显示:软脂酸干预48h，PL、PM、PH组ACCmRNA的表达与NC组相比分别下降了11%（P0.05）、18%（P0.05）、37%（P0.01），CPT-1mRNA的表达分别上升了28%（P0.05）、77%（P0.01）、100%（P0.01），FASmRNA的表达有下降的趋势，但各组间统计无差异，DGAT1mRNA的表达在各组间差异无统计学意义。结论：1软脂酸能够损伤人源性GLP-1分泌细胞的活性，并且这一现象是浓度依赖性的；2软脂酸引起人源性GLP-1分泌细胞内脂质代谢酶ACC、CPT-1mRNA表达的改变，这些改变可能参与了软脂酸对细胞的毒性损伤作用。关键词：软脂酸；细胞活性；脂质代谢；肠道内分泌L细胞；胰高血糖素样肽-1AbstractObjective:Thepercentagesofpeoplewithtype2diabeteshaverapidlyincreasedthroughoutourCountry.Researchersproposedtha