乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖及igf-1igf-1r mrna表达的影响-effects of lactoferrin on proliferation of osteoblasts and igf - 1 igf - 1r mrna expression in rats.docxVIP
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乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖及igf-1igf-1r mrna表达的影响-effects of lactoferrin on proliferation of osteoblasts and igf - 1 igf - 1r mrna expression in rats
乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖及IGF-1/IGF-1RmRNA表达的影响中文摘要目的:研究不同浓度的乳铁蛋白对体外培养的原代成骨细胞增殖影响及对IGF-1/IGF-1R基因表达的影响,探讨乳铁蛋白抗骨质疏松的分子机制,为临床用药提供实验依据。方法:(1)采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法分离获得原代成骨细胞;采用“差速贴壁法”进行纯化。光镜下观察细胞的形态结构和生长状况,通过碱性磷酸酶染色和Ⅰ型胶原免疫组化染色SABC法对细胞进行鉴定。(2)取第二代成骨细胞,用不同浓度的乳铁蛋白(0、0.1、1、10、100、1000ug/ml)干预成骨细胞,在1、3、5、7天后,用噻唑蓝比色法(MTT)测定增殖;实时荧光定量聚合酶链反应法(Realtime-PCR)检测其对胰岛素样生长因子(IGF-1)及其受体(IGF-1R)基因的表达水平。结果:(1)镜下观察所获得的细胞具有成骨细胞的典型特征,细胞多为单核,呈三角形、多边形、长梭形等形态,并伸有粗大伪足;碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。(2)MTT结果显示低浓度(0.1ug/ml)组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ul组均能促进成骨细胞增殖,与对照组比较,在不同的时间差异有统计学意义(P0.05),其中10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ul组差异具有显著统计学意义(P0.01)。随着时间的推移,不同浓度的LF使成骨细胞的数量增加,其中100ug/ml组在第7天细胞增殖数目达到最大。(3)RT-PCR结果显示与对照组相比,10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ml组IGF-1mRNA表达量有增加,在不同的时间差异有统计学意义(P0.05),其中10ug/ml、100ug/ml组差异具有显著统计学意义(P0.01)。在时间方面,随着时间的推移,不同浓度的LF使成骨细胞IGF-1mRNA表达量呈增加趋势,与对照组相比,各浓度组在第5、7天IGF-1mRNA表达量有增加,具有显著统计学意义(P0.01)。(4)RT-PCR结果显示与对照组比较,10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ml组IGF-1RmRNA表达量有增加,在不同的时间差异有统计学意义(P0.05),其中10ug/ml、1000ug/ml组差异具有显著统计学意义(P0.01)。在时间方面,随着时间的推移,不同浓度的LF使成骨细胞IGF-1RmRNA表达量呈增加趋势,与对照组相比,各浓度组在第3、5、7天IGF-1RmRNA表达量有增加,差异具有统计学意义(P0.05),其中各浓度组在第5、7天差异具有显著统计学意义(P0.01),结论:(1)采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法体外分离成骨细胞,在采用多次“差速贴壁法”可以获得数量多且纯,并且活性很好的成骨细胞。(2)乳铁蛋白能促进大鼠成骨细胞增殖,并且能提高IGF-1/IGF-1RmRNA的表达,可能是乳铁蛋白防治骨质疏松的机制之一。关键词:原代培养;大鼠;混合酶消化法;乳铁蛋白;成骨细胞;IGF-1;IGF-1R;碱性磷酸酶;MTT法;实时荧光定量PCR;骨质疏松Theeffectsoflactoferrinonproliferation、differentiationandexpressionsofIGF-1/IGF-1RmRNAinratprimaryosteoblastsABSTRACTObjective:ToinvestigatetheeffectsoflactoferrinonproliferationandexpressionsofIGF-1/IGF-1RmRNAinratprimaryosteoblasts.Methods:Osteoblastswereseparatedbymultienzymedigestionmethodsfromthecranialbonesof6newbornSDratscultured.Lactoferrinoftheconcentrationsof0、0.1、1、10、100、1000ug/mlwereadministratedintotheculturemediumfor1、3、5、7days.Theproliferationofosteoblastswasdetectedby3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromidetest(MTT).ThemRNAexpressionofInsulin-likegrowthfactor1(IGF-1)andInsulin-likegrowthfactor1receptor(IGF-1R)wereexami
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