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CTGF和TIMP-1shRNA对肝纤维化大鼠的影响摘要目的：研究CTGF和TIMP-1短发夹RNA（shorthairpinRNA，shRNA）表达质粒重组体对肝纤维化大鼠肝脏组织CTGF、TIMP-1、Col-I 及Col-IIImRNA基因表达及CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-III蛋白表达情况的影响，探索抗肝纤维化的机制，为肝纤维化的基因治疗探索新思路。方法：50只清洁级Wistar雄性大鼠被随机分为A组：双重RNA干扰组；B组：CTGF干扰组；C组：TIMP-1干扰组；D组：空载质粒治疗对照组；E组：模型对照组。每组大鼠腹腔注射1％DMN溶液，每次注射80μl／100g，每周连续注射3次，共3周。从第3周末开始尾静脉高压注射质粒干扰：A 组注射psiRNA-GFP-Com（含有CTGF 和TIMP-1)，B 组注射psiRNA-GFP-CTGF，C组：注射psiRNA-GFP-TIMP-1，D组注射空载质粒psiRNA-DUO-GFPzeo，E组：不注射。每2周注射1次，共4次。所有大鼠于实验第12周末处死，收集肝组织备用。各组肝脏组织中性甲醛固定后HE染色检测肝组织病理形态学改变，免疫组织化学检测各组肝组织中CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III蛋白表达情况。抽提各组肝脏组织RNA并逆转录成cDNA通过荧光定量PCR检测各组肝脏组织的CTGFmRNA、TIMP-1mRNA、Col-ImRNA及Col-IIImRNA的表达情况。结果：与模型对照组（E组）相比，空载质粒治疗组（D组）CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-IIImRNA及肝脏组织中的CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III蛋白的表达均无差异，A组、B组、C组CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-IIImRNA的表达降低，肝脏组织中CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III蛋白的含量减少，其中双重RNA干扰组psiRNA-GFP–Com质粒转染（A组）肝纤维化大鼠后其对Col-ImRNA的表达及肝组织中I型胶原的蛋白含量的抑制程度优于单干扰组质粒转染（P＜0.01或P＜0.05）。结论：1.针对CTGF和/或TIMP-1的RNA干扰可明显抑制肝纤维化大鼠的CTGF、TIMP-1、Col-I及Col-III基因表达及相关蛋白的分泌。2.双重联合RNA干扰作为抗肝纤维化基因治疗的方法，其治疗效果可能会优于单个RNA干扰。关键词：RNA干扰；结缔组织生长因子；基质金属蛋白酶组织抑制因子-1；短发夹RNA；转染；肝纤维化；大鼠；尾静脉高压注射；N-二甲基亚硝胺EffectofCTGFshRNAandTIMP-1shRNAonratswithhepaticfibrosisAbstract:Objectives:TostudytheeffectofCTGFshRNA andtheTIMP-1shRNAplasmidsontheexpressionofTIMP-1,CTGF,Col-IandCol-IIImRNAsandtheexpressionofCTGF,TIMP-1,Col-IandCol-IIIproteinsintheratswithhepaticfibrosis,andfuthertoexploretheprophylaxismechanismofshRNA,andtofindanewmethodofgenetherapyofhepaticfibrosis.Methods:50Clean-levelwistar maleratswererandomlydividedinto5groups.GroupA：doubleRNAinterferencegroup；GroupB:CTGFinterferencegroup；GroupC:TIMP-1interferencegroup；GroupD:emptyvectortreatmentcontrolgroup；GroupE:fibrosismodelcontrolgroup.Theratswereinjectedwith1%oftheDMNsolutionbyintraperitonealinjectionandeachinjectionvolumewas80μl/100g,threetimesaweekforthreeweeks.Theinterferencewasstartedfromthe3rdweekbythetailveinofhigh-pressureinjectionofplasmid.GroupA,theinjectionofpsiRNA-GFP-Com(targetingCTGFandTIMP-1);GroupB,theinjectionofps