caffeine通过a2a受体sirt3ampk信号通路诱导自噬以缓解氧化应激导致的细胞衰老word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 了 Caffeine 诱导自噬的作用，同时也增强了其缓解细胞衰老的作用；而自噬抑制 剂 3-MA 则减弱了 Caffeine 诱导自噬的作用，同时也阻断了其缓解细胞衰老的作 用，表明诱导自噬有利于缓解细胞衰老自噬参与了 Caffeine 缓解细胞衰老的过 程。 最后，考察 Caffeine 诱导自噬的分子机制。通过 western blotting 检测相关蛋 白表达，发现 Caffeine 可以提高 SIRT3 的蛋白表达和 AMPK 的磷酸化。选择性 A2A 受体拮抗剂 SCH 58261 也能增加 SIRT3 的蛋白表达和 AMPK 活化。同时， SCH 58261 也提高了 Beclin 1 的表达和 LC3 I 向 LC3 II 的转化减少了 p53 的磷酸 化和 p21 的表达，并且其效果优于 Caffeine。选择性 A2A 受体激动剂 CGS 26180 则阻断了 Caffeine 提高 SIRT3 蛋白表达和 AMPK 磷酸化的作用，并且还减弱了 Caffeine 对 Beclin 1 表达、LC3 I 向 LC3 II 转化、p53 的磷酸化和 p21 表达的影响。 激光共聚焦显微技术检测 SAHFs 发现 SCH 58261 和 Caffeine 均能显著减少 SAHFs 阳性细胞百分比，而 CGS 26180 则减弱了 Caffeine 的作用。以上结果表 明 Caffeine 可能通过拮抗 A2A 受体而上调 SIRT3 表达，激活 AMPK，诱导自噬 进而缓解细胞衰老。用 siRNA 转染技术干扰 SIRT3 基因表达后，Caffeine 诱导的 AMPK 磷酸化显著减少，提示 SIRT3 是 AMPK 上游的调节因子。此外，Caffeine 上调自噬相关蛋白表达和下调 p53 磷酸化及 p21 表达的作用也被 SIRT3 的 siRNA 转染阻断，说明 Caffeine 通过上调 SIRT3 激活 AMPK 进而诱导自噬缓解细胞衰 老。 综上所述，AAPH 可以导致 A375 细胞氧化应激，从而诱导细胞衰老。Caffeine 能通过诱导自噬，特别是线粒体自噬，而缓解氧化应激导致的细胞衰老。Caffeine 诱导自噬的机制可能与 A2A 受体/SIRT3/AMPK 信号通路有关。 关键词：Caffeine；细胞衰老；自噬；A2A 受体；SIRT3；AMPK III Abstract Cellular senescence and autophagy are two kinds of cellular response to stress. The relationship between them during stress is ambiguous. Accumulating evidence indicates that autophagy can regulate cellular senescence and influence cellular lifespan. Caffeine has been reported to induce autophagy in yeast and mammal cells. Besides, it has also been shown to extend the life-span of yeast and attenuate senescence. However, whether autophagy has involved in the mechanism of caffeine in attenuating cellular senescence remains unknown. In this study, the relationship between the anti-senescence effect and the autophagy-inducing effect of caffeine and the mechanism involved in the autophagy-inducing effect of caffeine will be further studied. We used a free radical initiator, AAPH, to induce oxidative stress and establish a model of oxidative stress-induced cellular senescence in human A375 melanoma cells. Inhibition ratio of proliferation was de